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辽宁省教育厅基金(L2010627)
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刘旭
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外源性PTEN对胰腺癌细胞ASPC-1增殖、侵袭及转移的影响
2012年
目的研究第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)对胰腺癌细胞系ASPC-1细胞周期、细胞增殖、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达、裸鼠成瘤及转移能力的影响。方法将含PTEN基因的质粒pE—PTEN转染ASPC-1细胞,以空质粒pE转染为对照,分别获得ASPC-1-pE-PTEN(A—pE—P)细胞及ASPC-1-pE(A—pE)细胞。应用RT—PCR检测细胞PTENmRNA表达;免疫细胞化学法检测PTEN、VEGF、EGFR蛋白表达;克隆形成实验观察克隆形成数;Transwell小室观察细胞侵袭能力;裸鼠皮下注射癌细胞法观察成瘤情况。结果与ASPC一1细胞比较,A—pE—P细胞的PTENmRNA表达增加179.3%,PTEN蛋白表达明显增加;VEGF蛋白表达明显减少;EGFR蛋白表达无明显变化;G2/M期细胞数明显增加[(31.5±1.76)%比(26.81±1.03)%,P〈0.05];克隆形成数降低[(24.0±3.9)比(33.3±3.4),F=4.283,P〈0.01],克隆形成率降低28%;穿膜细胞数明显减少[每高倍视野(46.3±6.6)比(63.8±7.5)个,F=2.476,P〈0.05];种植瘤体积明显缩小[(142.4±30.9)比(202.7±43.6)mm^2,t=4.834,P〈0.01],抑瘤率达42.4%;远处转移灶明显减少[(2.0±0.7)比(5.0±1.3)个,t=0.451,P〈0.01]。结论PTEN基因转染后ASPC-1细胞VEGF表达减少,细胞生长被阻滞在G2/M期,增殖及转移被抑制。
李宏宇
李建军
刘旭
吴春燕
赵佳钧
陈延志
郭晓钟
关键词:
胰腺肿瘤
肿瘤抑制
药理浓度抗坏血酸诱导胰腺癌PANC1细胞的死亡方式及机制研究
2012年
目的探讨抗坏血酸(Asc)对胰腺癌PANC1细胞的生物学影响及其作用机制。方法PANC1细胞用不同浓度(0~40nmol/L)Asc处理24、48、72h。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Asc对胰腺癌PANC1细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态,应用JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位。同时,观察Asc对抗氧化剂过氧化氢酶(catalase)及红细胞(RBC)预处理的PANC1细胞形态及线粒体膜电位的影响。结果药理浓度Asc选择性抑制PANC1细胞增殖,并呈浓度、时间依赖性。5mmol/LAsc处理后PANC1细胞被阻滞在G2/M期[(32.55±7.14)%比(22.00±1.27)%,t=5.808,P〈0.05],但凋亡率未见增加[(1.98±1.80)%比(1.09±0.16)%]。≥5mmol/LAsc诱导PANC1细胞发生胀亡性死亡,细胞线粒体膜电位呈浓度依赖性明显降低。catalase及RBC预处理能明显抑制细胞线粒体膜电位的下降,减轻细胞发生胀亡的程度。结论Asc在体外对胰腺癌PANC1细胞有明显的增殖抑制作用。Asc诱导PANC1细胞发生胀亡性死亡,而不是凋亡,其机制可能与线粒体膜电位下降有关。
高燕
梁丹红
宋薇
杜冀晖
张厚德
徐克成
关键词:
胰腺肿瘤
抗坏血酸
细胞死亡
过氧化氢
线粒体膜电位
乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染对胰腺癌AsPC1细胞增殖、转移的影响
2012年
目的观察乏氧环境下PTEN和KAI1基因双转染人胰腺癌AsPCI细胞后对其增殖、迁移的影响。方法应用我们前期构建的PTEN和KAI1基因过表达载体同时转染乏氧环境培养的人胰腺癌AsPCI细胞,采用蛋白质印迹法检测PTEN和KAI1蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,克隆形成实验观察肿瘤细胞形成集落能力,Transwell小室实验观察细胞的迁移能力。结果双基因转染后,乏氧培养的AsPCI细胞的PTEN、KAI1蛋白表达量较空载体转染组细胞增加2.05倍及1.51倍;细胞增殖显著减缓(0.5比0.8,P=0.000);克隆形成数显著下降[(41.67±5.03)个比(86.00±7.81)个,P=0.017)];细胞迁移能力明显减弱(0.68±0.05比1.23±0.03,P=0.003)。结论乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染AsPCI细胞后能够抑制其增殖、迁移能力,基因联合治疗胰腺癌可能具有潜在的应用价值。
李宏宇
李建军
郭晓钟
刘旭
吴春燕
赵佳钧
陈延志
关键词:
胰腺肿瘤
细胞系
肿瘤
转染
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