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构建与人肝细胞系L02相容的聚丙烯生物杂化界面(英文): 2008年; 学术背景:具有良好生物相容性的肝细胞/聚合物界面是生物反应器设计和构建的关键因素,然而,目前临床实践中使用的生物反应器并不理想。目的:构建与人肝细胞相容的聚丙烯生物杂化界面,为用聚丙烯中空纤维管构建生物人工肝反应器奠定基础。设计、时间及地点:对比观察,细胞相容性实验,于2003-02/10在上海交通大学完成。材料:聚丙烯利用光化学接枝聚合改性技术,在微孔聚丙烯超滤膜表面通过化学键的形式接枝亲水性丙烯酰胺基团形成接枝改性微孔聚丙烯超滤膜。方法:将人肝细胞系L02接种于聚丙烯膜、接枝改性聚丙烯膜表面,以聚苯乙烯作为正常对照。主要观察指标:聚丙烯膜接枝改性前后的静态水相接触角度;人肝细胞系L02在不同材料表面形态、贴壁率及增殖活性。结果:聚丙烯膜接枝改性后的静态水相接触角小于接枝前(P<0.05)。人肝细胞L02在改性后聚丙烯膜上的贴壁率为0,细胞成球形聚集体生长,其增殖活性明显高于聚苯乙烯和改性前聚丙烯膜。结论:在聚丙烯表面接枝聚丙烯酰胺可建立良好的人肝细胞系L02与聚丙烯生物杂化界面,并可通过简单的静止培养形成肝细胞球形聚集体。; 韩宝三沈柏用张瑞高长有马祖伟王兆海程东峰彭承宏李宏为; 关键词：肝细胞聚丙烯类表面改性生物材料

微载体培养技术的研究与进展被引量：12: 2010年; 背景:微载体培养技术是一种新兴的大规模细胞培养技术,广泛地应用于组织工程中种子细胞的扩增。微载体具有比表面积大等优点,在微载体培养技术中具有决定性作用。目的:文章就近年来制备微载体的生物材料和方法的研究进展做一综述,为微载体培养技术和组织工程的研究提供理论基础。方法:由第一作者于2009-10应用计算机检索PubMed数据库、万方数据库和维普数据库相关文献。英文资料的检索时间为1967/2009;中文资料的检索时间为1990/2009。英文检索词为"microcarrier,biomaterials cell culture,tissue engineering";中文检索词为"微载体,生物材料,细胞培养,组织工程"。纳入标准:①微载体材料、制备工艺及性能的研究。②微载体细胞培养的研究。③动物实验及临床应用。阅读标题和摘要进行筛选,共纳入34篇用于综述。结果与结论:虽然国内外研究人员在微载体的研究与制备方面做了很多工作,但迄今仍与临床应用有一定的距离。目前的主要工作是将不同种类的材料通过新型的工艺制备得到复合材料,通过表面改性来调节微载体的力学和生物降解性能。; 周燕刘宝林杨波王欣彭承宏韩宝三; 关键词：微载体生物材料细胞培养

微囊化技术在医学领域中的应用与进展被引量：10: 2010年; 背景:微囊的免疫隔离保护和可控缓释的特性得到了医学领域的重视,并已广泛应用于糖尿病、帕金森症、肝衰竭、镇痛、肿瘤等疾病治疗过程中。目的:综述微囊化技术的特性以及在医学研究领域中的应用。方法:由第一作者检索1964/2009PubMed数据库(网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed),2000/2009万方数据库(网址http://www.wanfangdata.com.cn)有关微囊化移植,微囊化可控缓释,微囊化技术在医学应用方面的应用方面的文献,英文关键词为"microencapsulated,transplantation,controlled release"。中文关键词为"微囊化"。结果与结论:微囊作为一种载体,为细胞提供了一个三维培养基质,改善细胞间的作用,提高细胞的功能;为异体细胞提供了免疫屏障,阻挡免疫细胞的识别,但又不妨碍营养物质、氧气及代谢产物运输;为机体提供可控的长期稳定缓释有效成分治疗疾病。微囊化技术在糖尿病方面研究比较多,在帕金森症、肝衰竭、脊髓损伤、甲状旁腺功能低下、骨科领域、肿瘤癌症等方面也有一定的探索,但微囊化技术从个别动物试验成功到真正临床广泛应用还有很漫长的历程,在拓宽微囊化技术在医学领域运用的同时,需进一步加强理想刚性结构、良好生物相容性和可控半透膜性的探索。; 杨晓昀陈儿同周燕刘宝林张华徐文强李巧巧叶萍彭承宏韩宝三; 关键词：微囊化生物人工肝胰岛免疫隔离

微囊化细胞冻存的研究进展被引量：1: 2010年; 背景:细胞微囊化为细胞大规模、高活性体外培养及长期存储提供了新的途径,低温保存是目前保存细胞的重要方法,技术日新月异,复苏细胞在临床和基础研究中的应用越来越多。目的:分析近年来微囊化细胞冻存的相关研究,对微囊化细胞冻存技术的发展作一总结。方法:以"微囊,冻存"为检索词,检索中国期刊网(1979/2010)及维普数据库(1989/2010),限定文章语言种类为中文;以"Cryopreservation,Microencapsule"为检索词,检索PubMed数据库(1979/2010),限定文章语言种类为English。纳入含有微囊化细胞冻存的研究,排除其他形式细胞冻存的研究,结果以各种细胞微囊化后进行冻存处理后产生作用为指标,共检索到43篇文献。结果与结论:随着生物人工肝与以及其他细胞移植研究的深入,对微囊化细胞的需要量将显著增加,微囊化细胞的低温保存技术已成为保正其顺利应用的关键技术之一。目前,微囊化细胞的低温保存技术已经开展了不少研究,有多项研究结果表明复苏后微囊化细胞的存活率和生物学功能都能保持较好的水平,但相关机制仍未完全阐清,各种冻存方法还需要优化。; 余松林韩宝三杜志勇吴旭波吴薇王加祥黄芳李宏为沈柏用彭承宏; 关键词：冻存保护剂

一种新型生物人工肝膜材料体外激活血小板的实验被引量：1: 2005年; 目的 :体外研究一种新型生物人工肝反应器材料 -丙稀酰胺接枝改性聚丙烯膜 (PP -g -AAm)对血小板的激活 ,并评价其血液相容性。方法 :模拟体内条件将PP -g -AAm膜和对照组未改性的聚丙烯 (PP)膜与富含血小板血浆 (PRP)接触后 ,用ELISA法检测血浆中 β -血小板球蛋白 (β -TG)的表达 ,用流式细胞术检测血小板活化标志CD6 2P和CD6 3的表达 ,用扫描电镜检测两种膜上血小板粘附情况。结果 :两种膜材料接触PRP 30min后 ,血浆β-TG的表达均高于空白对照组 (P <0 . 0 1,P <0 . 0 5 ) ,两材料组之间差异显著 (P <0. 0 5 ) ;PP -g -AAm膜激活血小板表达CD6 2P、CD6 3的百分率都明显少于PP膜 (P <0. 0 5 ,P <0 . 0 1) ;两种膜材料接触PRP 1h后 ,扫描电镜观察材料表面粘附的血小板都有明显变形 ,但PP -g-AAm膜表面粘附的血小板明显少于PP膜。结论 :PP -g -AAm膜对血小板的激活明显少于PP膜 ,具有较好的血液相容性。; 彭承宏赵之明刘宏韩宝三王涌方河清吴育连高长有; 关键词：血液相容性生物相容性材料血小板

新型人工肝材料——接枝改性聚丙烯膜体外免疫相容性的实验研究被引量：7: 2004年; 目的　通过体外检测改性前、后聚丙烯 (PP)膜对健康青年人外周血单个核细胞(PBMC)的激活程度 ,来评价聚丙烯酰胺接枝改性聚丙烯 (PP g AAm )膜的免疫相容性。方法　用生化法检测 2h、6h两种膜材料表面PBMC的乳酸脱氢酶 (LDH)值 ;用流式细胞术检测 2 4h两材料上培养的PBMCCD6 9的表达 ;ELISA法检测培养上清中细胞因子TNFα、IL 1β和IL 6的浓度 ;用扫描电镜 (SEM )观察材料上黏附的PBMC。结果　 2h及 6h ,两材料组间LDH差异有显著意义 (P =0 0 0 8,P =0 0 0 0 ) ;PP g AAm膜组CD6 9活化率显著少于PP膜组 (P =0 0 13) ;2 4h两材料组细胞因子的浓度均达到最高峰 ,且PP g AAm膜组TNFα ,IL 1β和IL 6的浓度都小于PP膜组 (P =0 0 0 4 ,P =0 0 0 3,P =0 0 2 2 ) ;SEM观察到PP g AAm膜表面黏附的PBMC较少。结论　PP g AAm膜对PBMC的激活程度较轻 ,具有较好的免疫相容性。; 彭承宏赵之明王涌刘宏韩宝三吴育连刘颖斌方河清; 关键词：PBMC AA 人工肝体外 TNFΑ 免疫

人肝细胞/微孔聚丙烯超滤膜生物界面构建的研究被引量：10: 2004年; 目的　建立与人肝细胞相容的微孔聚丙烯超滤膜杂化界面 ,为用聚丙烯中空纤维管构建生物人工肝的反应器奠定先期基础。方法　通过化学接枝聚合的方法在微孔聚丙烯超滤膜表面接枝聚丙烯酰胺 ,并结合微载体cytodex 3对人肝细胞L 0 2在其表面的生长特性进行检测评价。结果同接枝前比较 ,接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的静态水相接触角由 78°± 5°降低为 2 7°± 4°(P <0 0 5 ) ,提高了亲水性 ,使人肝细胞L 0 2只在微载体cytodex 3表面生长 ,提高了培养肝细胞L 0 2的密度、活性和微孔聚丙烯超滤膜的滤过效能。结论　在微孔聚丙烯超滤膜表面接枝聚丙烯酰胺是建立人肝细胞 /微孔聚丙烯超滤膜相容生物杂化界面的一种有效方法。; 彭承宏韩宝三高长有马祖伟赵之明王涌刘宏张桂娣杨梅娟; 关键词：肝细胞超滤膜微载体表面特性

壳聚糖相对分子质量对微囊及包裹肝细胞活性的影响: 2011年; 目的观察壳聚糖相对分子质量对微囊机械强度和通透性及包裹肝细胞活性的影响。方法通过微囊搅拌实验比较中、低分子量壳聚糖形成的微囊的机械强度，比较2种微囊对异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC—BSA）通透性，及细胞染色实验判断2种微囊包裹小鼠原代肝细胞活性的区别。结果微囊搅拌100min后中分子量壳聚糖微囊破损率100％，低分子量壳聚糖微囊破损率5％，两种微囊机械强度差异有统计学意义（P〈0．05），微囊溶液中加入FITC—BSA15min后，低分子量壳聚糖微囊内荧光强度为4AU，中分子量壳聚糖微囊内荧光强度为1．5AU，两种微囊对FITC—BSA的通透性差异有统计学意义（P〈0．05），低分子量壳聚糖形成的微囊包裹肝细胞培养1周后细胞染色实验显示微囊中活肝细胞数为100％，中分子量壳聚糖形成的微囊包裹的活肝细胞数约为40％，两者差异有统计学意义（P〈0，05）。结论低分子量壳聚糖相对于中分子量壳聚糖更适合于作微囊的材料。; 王加祥韩宝三吴旭波余松林彭承宏; 关键词：肝细胞微囊壳聚糖

Preliminary Characteristic of Alginate,Heparin-Chitosan-Alginate,Heparin Microencapsulated Hepatocytes System: 2012年; Alginate,low mole mass heparin-chitosan-alginate,low mole mass heparin microcapsules(ALCAL) with good mechanical stability were made from the high voltage pulsing microcapsule shaping device.ALCAL was made of low-mole-mass heparin(LMWH),alginate(ALG)and chitosan(CS)by supramolecular layer upon layer self-assembled technique.It was found from the microscopic observation that the microcapsules had smooth surface and a porous structure with interconnected pores.The results of the permeability experiment of microcapsules using fluorescein isothiocyanate-bovine serum albumin(FITC-BSA)and fluorescein isothiocyanate-immunoglobulin G(FITC-IgG)showed that the ALCAL membrane could provide cell immuno-isolation;meanwhile,the ALCAL membrane had good biocompatibility.The potential of ALCAL microcapsules for the encapsulation of liver cells had been investigated and showed that the ALCAL membrane supports the survival,proliferation and protein secretion on encapsulating hepatocytes.The ALCAL microcapsule had several advantages compared to more widely used alginate-chitosan-alginate(ACA)microcapsules for the application of cell therapy.; 余松林韩宝三崔龙董亚东王加祥彭承宏; 关键词：MICROCAPSULE HEPATOCYTES

壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞L-02的高浓度细胞培养被引量：1: 2011年; 背景:微载体培养技术作为一项体外高浓度细胞培养技术,近年来已在肝细胞的体外培养中得到应用。目的:对壳聚糖球形多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察。方法:以自制的壳聚糖球形多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02设为实验组;无壳聚糖球形多孔微载体支持下人肝细胞的培养设为对照组。对两组细胞进行定时的细胞计数,并对实验组进行形态学观察,包括倒置相差生物显微镜观察和扫描电子显微镜观察。结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3天细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数明显高于对照组无微载体培养的细胞数量(P<0.05),实验组各样本之间差异无显著性意义(P>0.05);倒置相差生物显微镜下动态观察,可见前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,第3天可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜观察,微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附。提示,以自制的壳聚糖球形多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高浓度细胞培养。; 张瑞韩宝三彭承宏; 关键词：微载体壳聚糖人工肝脏肝细胞培养

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国家自然科学基金(20074031)

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