江苏省自然科学基金(BK2011129)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：任发亮黄丹顾恒陈旭陈崑更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院常熟市新区医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞自噬对凋亡影响的初步研究被引量：12
- 2012年
- 目的探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响。方法人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养，连续传代培养后取第3～10代的细胞进行实验。通过单丹酰戊二胺（MDC）染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3（LC3）的方法，确定不同剂量3-甲基腺嘌呤（3-MA）对自噬的抑制作用。UVB照射后立即加入0．5mmol／L3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法。Hoechst和碘化丙啶（PI）染色结合AnnexinV-异硫氰酸荧光素（FITC）和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法。结果0．5mmol／L3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性（饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63．037％±5．876％，3-MA孵育后下降至34．425％±5．183％）。空白对照组、30、50、100mJ／cm。UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强，照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显。0．5mmol／L3-MA对细胞活性影响最小。50mJ／cmzUVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多；100mJ／cm2UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少。AnnexinV—FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示，在50mJ／cmzUVB照射下，抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[（10．933±0．839）％]较未抑制细胞[（7．267±0．473）％]上升，两者之间差异具有统计学意义（t=5．20，P〈0．05）；而在100mJ／cmzUVB照射下，抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[（7．100±0．781）％]较未抑制细胞[（10．133±0．681）％]下降，两者之间差异具有统计学意义（t=6．29，P〈0．05）。结论50mJ／cm。UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用，而在100mJ／cm。UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬．I生细�
- 陈旭张青松鞠梅任发亮黄丹齐蓓陈崑常宝珠李新宇顾恒
- 关键词：紫外线成纤维细胞自噬
- 角质形成细胞中的自噬现象被引量：3
- 2012年
- 自噬是细胞内溶酶体降解胞内大分子或细胞器的过程。最近研究提示，角质形成细胞中存在自噬现象。自噬参与角质形成细胞的分化过程，也是老化的角质形成细胞的死亡方式。部分上皮源性肿瘤中自噬被诱导，可能与其侵袭性、转移有关。自噬减轻角质形成细胞中的炎症。某些药物如卡泊三醇、氨基酮戊酸、5-氟尿嘧啶可诱导自噬而发挥相关作用，自噬还可能参与角质形成细胞、黑素细胞中巨大黑素颗粒或巨大黑素小体的形成。概述自噬在角质形成细胞中的作用。
- 任发亮黄丹陈旭顾恒
- 关键词：角质形成细胞自噬细胞分化
- 西罗莫司诱导自噬对UVB辐照下HaCaT细胞增殖和凋亡的初步影响被引量：3
- 2013年
- 目的:研究西罗莫司诱导自噬对UVB致HaCaT细胞光损伤的干预作用。方法:设置6组,分别为空白组、二甲基亚砜(DMSO)组、25mJ/cm^2 UVB组、25 mJ/cm^2 UVB+西罗莫司组、50mJ/cm^2 UVB组、50mJ/cm^2 UVB+西罗莫司组。单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测不同处理后HaCaT细胞的自噬并比较各组自噬水平。噻唑蓝(MTT)法检测不同处理后HaCaT细胞的增殖活性。Hochest、碘化丙啶(PI)染色观察HaCaT细胞的凋亡和坏死。结果:MDC染色结果可见西罗莫司处理组的自噬体阳性细胞百分率分别高于相应UVB照射组。MTT法检测到25 mJ/cm^2 UVB+西罗莫司组的细胞增殖抑制率低于25 mJ/cm^2 UVB组,而50mJ/cm^2 UVB+西罗莫司组高于50 mJ/cm^2 UVB组。Hochest染色观察到西罗莫司处理组的凋亡百分率分别低于相应UVB组。PI染色可见UVB照射组出现坏死细胞,而西罗莫司干预组未见坏死细胞。结论:西罗莫司诱导自噬可减轻25 mJ/cm^2 UVB辐照对HaCaT细胞增殖能力的抑制,而在50mJ/cm^2 UVB辐照下加重对细胞的抑制。西罗莫司诱导自噬可明显减轻25、50mJ/cm^2 UVB辐照下HaCaT细胞的凋亡和坏死,对UVB损伤有保护作用。
- 任发亮黄丹陈旭郑云鹏陈崑鞠梅常宝珠李新宇顾恒
- 关键词：角质形成细胞自噬西罗莫司
- 西罗莫司对UVB照射HaCaT细胞自噬的影响
- 2013年
- 目的探讨西罗莫司能否增加中波紫外线（UVB）照射下HaCaT细胞的自噬水平。方法0、25、50mJ／cm^2 UVB照射HaCaT细胞，单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色法检测自噬。设置空白组、DMSO组、25mj／cm^2 UVB组、25mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组、50mJ／cm2UVB组、50mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组共6组，MDC染色法检测自噬，并比较各组自噬水平。结果结果UVB照射HacaT细胞后出现了自噬，0、25、50mJ／cm^2照射组自噬体阳性细胞分别为1．07％±1．85％、9．37％±1．14％、16．29％±3．03％，3个剂量间差异有统计学意义；6组自噬体阳性细胞百分率分别为：0．56％±0．79％、1．61％±2．27％、10．00％±0．47％、21．18％±3．03％、15．82％±4．13％、29．45％±1．24％，各组两两比较差异均有统计学意义，且25mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组、50mJ／cm^2 UVB＋西罗莫司组的自噬水平均高于相应UVB组。结论UVB辐照HaCaT细胞后出现MDC染色自噬体阳性细胞，西罗莫司可能增加UVB照射下HaCaT细胞后的自噬水平。
- 任发亮黄丹陈旭郑云鹏陈崑鞠梅常宝珠李新宇顾恒
- 关键词：角蛋白细胞自噬西罗莫司
- 不同剂量中波紫外线照射对角质形成细胞增殖活力和自噬体表达影响的研究被引量：8
- 2013年
- 目的观察HaCaT细胞和原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线（UVB）照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化，并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法两种细胞各分为5组，对照组、5、10、20、40mJ／cm^2UVB照射组，照射结束后12h进行MTr实验或单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色，全波长酶标仪下读取各孔A值，倒置荧光显微镜下随机选取视野，计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。结果经不同剂量UVB照射后，HaCaT细胞的增殖活力（A值）较原代角质形成细胞下降更明显，其中HaCaT细胞10、20、40mJ／cm^2照射组（A值分别为1．367±0．035、1．173±0．034、0．873±0．025）两两之间以及与对照组（1．519±0．022）之间差异均有统计学意义（P〈0．01）；原代角质形成细胞仅10、20、40mJ／cm^2 UVB照射组（A值分别为0．782±0．012、0．773±0．021、0．725±0．031）与对照组（0．887±0．035）之间差异有统计学意义（P〈0．05）。5、10、20mJ／cm^2 UVB照射后两种细胞MDC染色，自噬体表达阳性的细胞比率均出现增加，但照射量至40m．1／cm^2 时则出现下降，以原代角质形成细胞下降更明显，其中HaCaT细胞10mJ／cm^2 和20mJ／cm^2 UVB照射组自噬体表达阳性率（分别为22．69％±2．15％、28．10％±2．92％）较对照组（10．18％±1．50％）有显著上升，而40mJ／cm^2 组自噬体表达上升幅度出现下降（趋势卡方检验r=27．48，P〈0．01）；原代角质形成细胞对照组、5、10、20mJ／cm2组间自噬体阳性率变化不大，但40mJ／cm2组表达出现明显抑制（趋势卡方检验r=6．86，P〈0．01）。结论UVB对HaCaT细胞和原代角质形成细胞增殖活力的损伤均有剂量依赖性，原代角质形成细胞更耐受UVB损伤；5、10、20mJ／cm2UVB照射能促进14aCaT细胞自噬体表达增加，且有剂量依赖性，�
- 黄丹任发亮陈旭陈崑顾恒
- 关键词：角质形成细胞自噬体紫外线
- UVB对雷帕霉素处理后HaCaT细胞增殖活力的影响
- 2013年
- 目的:研究HaCaT细胞经雷帕霉素处理后对不同剂量中波紫外线(UVB)照射的HaCaT细胞增殖活力的影响。方法:培养的细胞分为实验组(照射前雷帕霉素预孵育)和对照组(未加药组),两组各分5小组,均分别接受0、5、10、20和40 mJ/cm^2剂量的UVB照射。MDC染色观察自噬体表达水平。MTT法检测细胞接受UVB照射后12小时吸光度(OD)值。结果:雷帕霉素处理后细胞的自噬体表达明显高于对照组;在0、5、10和20 mJ/cm^2 UVB照射组的OD值均低于对照组,而在40 mJ/cm^2 UVB组OD值高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:雷帕霉素预处理提高HaCaT细胞自噬水平后,对小剂量UVB照射后的HaCaT细胞增殖活力无保护作用,但对较大剂量UVB照射后HaCaT细胞增殖活力有保护作用。
- 黄丹郑云鹏陈崑陈旭任发亮李新宇顾恒
- 关键词：自噬HACAT细胞雷帕霉素细胞增殖
