湖南省自然科学基金(11JJ6078)
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：南华大学湖南环境生物职业技术学院中国科学院更多>>
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- 三邻甲苯磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞calpain活性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤细胞(SH-SY5Y)calpain活性的影响。方法用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用不同浓度的TOCP(0、0.25、0.5、1.0mM)染毒未分化或分化的SH-SY5Y细胞不同时间(12、24、48h),用20μM盐酸维拉帕米(verapamil)和100μM二苯基硼酸-2-氨基乙酯(2-APB)预处理细胞15min后染毒TOCP 1.0mM 48h,采用荧光分光光度法测calpain活性。结果随着染毒浓度和时间的增加,TOCP活化未分化与分化的SH-SY5Y细胞calpain活性(P<0.05),钙通道抑制剂verapamil和2-APB预处理细胞能抑制TOCP引起的calpain活性升高(P<0.05)。结论 TOCP通过SH-SY5Y细胞内钙紊乱而活化calpain活性。
- 肖双魏传杰唐凯玲李盛龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞钙蛋白酶盐酸维拉帕米
- 三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展被引量：1
- 2014年
- 三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性(OPIDN)为特征,造成机体永久性损伤。TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施。全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义。
- 肖双龙鼎新
- 关键词：迟发性神经毒性钙
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞分化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞形态分化的影响,为更全面的了解TOCP的毒性提供依据。方法选用人成神经瘤细胞SH-SY5Y为细胞模型,以全反式维甲酸(ATRA)为诱导分化工具药物,在诱导中以及诱导后以不同浓度TOCP作用,动态观察SH-SY5Y细胞形态学变化,台盼蓝拒染法检测死亡细胞百分比。结果 ATRA对SH-SY5Y细胞作用7 d可导致细胞出现长出较长突起的分化特征,在诱导分化过程中及诱导分化后以不同剂量TOCP作用于细胞,各剂量组与对照组相比,无论是突起长度还是分化细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),其中,0.6 mmol/L组抑制效果最强。结论 TOCP可抑制SH-SY5Y细胞的分化,并呈现一定时间和剂量依赖关系。
- 呼丹李小玲龙鼎新
- 关键词：全反式维甲酸分化
- 二氧化氯(ClO_2)氧化法对废水中甲胺磷农药的降解效果观察
- 2014年
- 目的探讨ClO2氧化法对废水中甲胺磷农药的降解效果。方法将传统活性污泥降解法和ClO2氧化法处理甲胺磷农药废水的结果进行比较,研究ClO2用量对含甲胺磷农药废水中化学需氧量(COD)值变化的影响。结果含甲胺磷农药废水中COD的去除率随着ClO2用量的增加和曝气时间的延长而稳步提高。当20 mL废水用25 mL ClO2氧化反应5 min时,COD由原来的7 697.31 mg/L降至391.2 mg/L,去除率达94.92%。经过拟合,ClO2处理甲胺磷废水的回归方程为:y=0.98x3-32.63x2-83.23x+7626.60,R2=0.98,其中x为ClO2量(mL),y为剩余COD值(mg/L)。用传统活性污泥降解法对含甲胺磷农药废水进行204 h降解处理,COD由8 230 mg/L降至1 451 mg/L,去除率为82.37%。结论与传统活性污泥降解法相比,ClO2氧化法所需时间短,对COD的去除率高,且无氯代有机物等二次污染物。ClO2氧化法是一种可取的甲胺磷农药废水治理法。
- 赵维超龙鼎新
- 关键词：甲胺磷废水治理
- pLC3-EGFP真核表达载体的构建与表达
- 2011年
- 目的构建人微管相关蛋白轻链3(LC3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达载体(pLC3-EGFP)并在哺乳动物细胞中表达,为研究自噬的过程及机制提供实验基础。方法应用RT-PCR从人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增全长LC3基因,将产物LC3 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-N3,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定。将表达质粒pLC3-EGFP转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,western blot检测LC3-EGFP蛋白的表达。结果测序结果表明,从人胚肾HEK293T细胞中所获得的LC3 cDNAs含有378个碱基,与Genbank(NM_022818)序列完全一致。构建的重组真核表达载体pLC3-EGFP经鉴定证实LC3基因已完全正确亚克隆到pEGFP—N3;LC3-EGFP融合蛋白能够在HEK293T细胞中表达,并主要定位于细胞质中。结论成功构建具有报告基因—增强绿色荧光蛋白基因的重组真核表达载体pLC3-EGFP并在HEK293T细胞中很好地表达,实验结果为研究细胞自噬的进程及机制提供了实验基础。
- 龙鼎新李小玲
- 关键词：自噬LC3克隆
- 稳定沉默Beclin1的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系的构建
- 2014年
- 为了构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体,并建立Beclin1稳定沉默的人成神经瘤SH-SY5Y细胞系,将合成的shRNA片段连接pGenesil-1质粒,构建成重组质粒pGenesil-1-Beclin1,转化其至感受态大肠杆菌JM109,挑取阳性克隆进行双酶切和DNA测序鉴定。常规培养SH-SY5Y细胞,将重组质粒pGenesil-1-Beclin1和空白对照质粒pGenesil-1转染SH-SY5Y细胞,G418抗性筛选,在荧光显微镜下挑取单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株,经RT-PCR和Western blot检测Beclin1基因的表达。经酶切和DNA测序鉴定重组真核表达载体构建正确,成功筛选出两株细胞系。和对照组转染pGenesil-1的细胞系相比,转染pGenesil-1-Beclin1细胞系的Beclin1mRNA表达下降71.28%±1.45%(P<0.05),Beclin1蛋白表达下降75.50%±2.63%(P<0.05)。提示已经成功构建pGenesil-1-Beclin1真核表达载体并建立了Beclin1基因稳定沉默的SH-SY5Y细胞系,为研究Beclin1功能提供了细胞模型。
- 魏传杰肖双江岚谭琰黄波龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞克隆
- 敌百虫对人成神经瘤细胞SH-SY5Y增殖与分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察敌百虫(trichlorfon,TCL)的对神经细胞增殖与分化的影响。方法用敌百虫(0～500μmol/L)染毒SH-SY5Y细胞,分别作用24 h和48 h,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期;采用维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5Y细胞分化,并用100μmol/L敌百虫染毒处理,观察细胞神经突起长出的长度及其与细胞体的大小之比,来判定神经元分化程度。结果敌百虫对细胞的增殖有显著的抑制作用,且显现剂量依赖相关和时间依赖相关。染毒24 h和48 h测得TCL对SH-SY5Y细胞的半数抑制浓度(IC50)分别是225μmol/L和177μmol/L。细胞诱导分化实验结果显示,对照细胞突起较长较多,而敌百虫处理神经细胞的突起则较少较短,提示敌百虫具有抑制神经突起生长的作用。流式细胞术分析表明,100μmol/L和200μmol/L敌百虫染毒24 h或48 h对SH-SY5Y细胞的运行周期产生显著影响,使细胞周期阻滞在G2/M期,但并没有使细胞产生凋亡。结论敌百虫可抑制神经突起的生长;敌百虫对SH-SY5Y细胞的增殖抑制与其对细胞周期的影响(阻滞细胞周期于G2/M期)有关。
- 龙鼎新伍一军
- 关键词：敌百虫细胞周期细胞增殖细胞分化
- 三邻甲苯基磷酸酯的神经毒性研究进展被引量：3
- 2017年
- 三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)是众多有机磷酸酯类化合物代表之一,有多器官毒性作用主要表现在对动物生殖毒性、免疫毒性和神经毒性。本文主要综述了TOCP分子理化特性、TOCP神经毒性作用的研究,并从骨架蛋白含量改变、氧化应激、细胞凋亡与细胞自噬等方面对TOCP神经毒性作用机制进行了综述。
- 江岚江岚
- 关键词：神经毒性
- 三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。
- 江岚李小玲魏传杰肖双谭琰刘瑶龙鼎新
- 关键词：SH-SY5Y细胞PKC
- DAPT阻断Notch信号通路对TOCP诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的影响
- 目的 探讨Notch在三邻甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)诱发SH-SY5Y细胞神经毒性中的关系,进一步阐述TOCP神经毒性的作用机制.方法 采用Notch信号通路阻断剂DA...
- 唐凯玲龙鼎新
- 关键词：TOCPSH-SY5YNOTCH信号通路细胞骨架
