国家重点基础研究发展计划(2009CB724703)
- 作品数：14 被引量：35H指数：4
- 相关作者：魏东芝王舒毛相朝孙际宾林金萍更多>>
- 相关机构：华东理工大学中国科学院天津科技大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程自动化与计算机技术更多>>
- 应用荧光分析法检测酶的研究进展被引量：7
- 2009年
- 酶是细胞新陈代谢的基础,酶的检测在生物技术、疾病诊断及药物开发等领域都具有十分重要的意义。在检测酶的诸多方法中,荧光法因其灵敏度高、检测限低等优势发展迅速。以下简述了近年来荧光法在酶检测领域的研究,根据检测方法的不同分为直接荧光检测法和间接荧光检测法,其中直接检测法又根据不同的底物标记及检测机理进行分类。以下介绍了各种方法的应用,并展望了此类方法的前景和发展趋势,为酶工程及生命科学其他领域的相关研究提供信息。
- 邢艳珑毛相朝王舒王华磊魏东芝
- 关键词：荧光探针
- 耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选和鉴定被引量：2
- 2011年
- 从国内各地采取土样分离筛选产耐有机溶剂脂肪酶的新菌株,通过形态和生理生化特征以及系统进化树分析,筛选到的新菌株命名为Pseudomonas aeruginosa CS-2.来自Pseudomonas aeruginosa CS-2的粗脂肪酶液在乙腈中酶活提高,在苯、氯仿、正己烷、石油醚和异辛烷中表现出较高的稳定性.
- 彭仁林金萍魏东芝
- 关键词：铜绿假单胞菌有机溶剂耐受性脂肪酶
- 氧化葡萄糖酸杆菌DSM 2003膜结合乙醇脱氢酶的纯化鉴定和性质研究被引量：5
- 2010年
- 通过超速离心收集膜组分、表面活性剂溶解膜蛋白、CM-纤维素柱层析纯化等步骤,从氧化葡萄糖酸杆菌DSM2003中获得电泳纯的具有1,2-丙二醇脱氢酶活性的脱氢酶,此酶由两个亚基组成,其表观相对分子质量分别为80000和50000。经MALDI-TOFMS-MS质谱分析与肽质量指纹图谱检索鉴定,证明纯化得到的酶是乙醇脱氢酶。酶学性质分析表明,该酶的最适反应温度为30℃,最适pH值为5.5～6.0;该酶能催化多种一元醇、二元醇,但对包含3个以上羟基的多元醇基本无氧化活性;其催化活性随着底物碳链长度的增加而减小;大多数金属离子及抑制剂(Cu2+、Fe3+、Ca2+、EDTA等)对此酶活性均有抑制作用。
- 韦柳静林金萍杨雪鹏魏东芝
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌纯化酶学特性
- 木瓜脂肪酶催化洛芬类药物的酶促拆分被引量：1
- 2012年
- 利用木瓜脂肪酶(CPL)作为催化剂对布洛芬类药物进行手性拆分,建立了底物布洛芬、布洛芬乙酯及其他洛芬类底物的手性检测方法,重点研究了拆分过程中反应温度、有机溶剂、底物结构对拆分效果的影响,并结合动力学分析揭示了木瓜脂肪酶催化手性拆分的分子基础。动力学分析表明对同一底物的不同构型而言,反应速率常数k2S及k2R的差异是木瓜脂肪酶具有手性拆分能力的基础,而不是由于酶对不同构型的底物具有不同的Km值;对一系列化合物的拆分结果表明2-芳基丙酸类手性化合物2位上空间位阻较大的底物比空间位阻小的化合物具有更好的拆分效果。实验表明CPL对洛芬类底物均具有拆分能力,对萘普生的拆分效果最好,经过30h的反应转化率达到49%,反应的对映体选择值(E值)为173。
- 尤朋永邱健蔡雯雯苏二正魏东芝
- 关键词：布洛芬手性拆分
- 一种蛋白质三维结构中残基重心的计算方法
- 2013年
- 基于蛋白质三维结构数据PDB,给出一种蛋白质残基重心的计算方法,同时阐述该方法的python语言的实现过程.该方法不需要知道残基侧链原子的坐标,只需知道主链上原子的坐标即可计算蛋白质残基间的距离.
- 陆文伟韦廷宗李涛杜丽琴黄日波
- 关键词：PDB球坐标PYTHON语言
- 谷氨酸发酵过程中N-乙酰-谷氨酰胺的积累被引量：1
- 2011年
- 在利用HPLC分析谷氨酸发酵过程样品时,发现在色谱峰17.5 min处有一未知物质,其UV信号比较强,且与谷氨酸积累相关,通过高压液相和串联质谱,该物质鉴定为N-乙酰-谷氨酰胺。对比分析不同发酵过程,N-乙酰-谷氨酰胺积累与谷氨酸偶联,且与谷氨酸产量呈相关。溶氧对N-乙酰-谷氨酰胺合成没有显著影响,玉米浆是影响其合成的重要因素,随着玉米浆添加量的增加,N-乙酰-谷氨酰胺/谷氨酸比值逐渐降低,当玉米浆添加量大于10 mL/L时,继续添加玉米浆该比值不受影响。
- 赵普亚黄磊孙村民曾祥峰贾士儒孙际宾
- 关键词：谷氨酸发酵玉米浆
- 一种改进的赖氨酸浓度测定方法被引量：4
- 2013年
- 茚三酮显色法是一种常用的氨基酸测定方法,可以对游离氨基酸进行定性、定量分析,但检测赖氨酸的选择性和准确度却较差。本研究通过对传统茚三酮方法的改进实现赖氨酸的特异性检测。研究发现,在pH2.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中只有赖氨酸可与茚三酮-铁试剂在480 nm处发生特征显色反应,其最佳测定条件为100℃反应35 min;并发现改进的方法赖氨酸的有效浓度为0-200 mmol/L。此方法可以排除脯氨酸、鸟氨酸、甘氨酸、精氨酸和组氨酸等杂质氨基酸的干扰,而且适用于对发酵液中赖氨酸浓度进行直接测定,结果准确可靠。
- 姜安娜曹名锋李庆刚郑平杨洪江孙际宾
- 关键词：赖氨酸显色反应特异性检测
- 氧化葡萄糖杆菌合成右旋糖酐糊精酶的pH两阶段控制策略被引量：1
- 2011年
- 为了进一步提高氧化葡萄糖杆菌右旋糖酐糊精酶的产量,在3 L发酵罐水平上考察了pH(3.5?6.0)对菌体生长和产酶的影响。基于不同pH发酵过程中菌体生长及产物合成的变化,确定了pH两阶段控制策略,即0?6 h时控制pH 5.0,6 h后将pH调至4.0。通过采用这一优化策略,右旋糖酐糊精酶酶活有了较大的提高,可达4.03 U/mL,比不控制pH模式下提高了38.5%,是摇瓶水平的12.5倍,同时发酵时间从47 h缩短为15 h。
- 王舒毛相朝李福利魏东芝
- 关键词：右旋糖酐
- 氧化葡萄糖酸杆菌立体选择催化2-甲基-1,3-丙二醇合成(R)-β-羟基异丁酸被引量：2
- 2010年
- β-羟基异丁酸是一种重要的化工医药产品,主要用于合成降压药卡托普利和其它的光学活性物质。试验利用氧化葡萄糖酸杆菌不对称氧化2-甲基-1,3-丙二醇合成了光学纯的(R)-β-羟基异丁酸,研究表明:在28℃和pH值5.5、底物浓度5 g/L、湿细胞浓度20 g/L的情况下,经过10 h的反应,(R)-β-羟基异丁酸的浓度达到20.5 g/L,转化率和光学纯度分别达到88.6%和95.3%。在培养基中添加一定量(0.1%)的1,2-丙二醇和乙二醇对菌体生长、立体选择性和催化活性都有一定的促进作用。通过流加2-甲基-1,3-丙二醇使其在反应体系中的浓度维持在5 g/L以下,以消除过高的底物浓度对细胞活性的抑制,在3.7 L反应器中经过24 h的反应,(R)-β-羟基异丁酸的浓度提高到50.2 g/L,摩尔转化率和光学纯度分别达到90.5%和93.2%。
- 魏国栋魏东芝林金萍
- 关键词：氧化葡萄糖酸杆菌生物转化3-丙二醇
- 产物作溶剂体系固定化酶催化合成棕榈酸异辛酯被引量：1
- 2010年
- 以产物作为溶剂,采用固定化脂肪酶催化合成棕榈酸异辛酯。考察了溶剂用量、底物用量比、水含量、水活度对反应的影响以及固定化酶的使用寿命。研究结果表明,最适溶剂量为每g棕榈酸3 mL棕榈酸异辛酯,最适醇酸物质的量比为1.3∶1;同时体系中水含量越高反应转化率越低,使用MgC l2饱和盐溶液可将反应体系的水活度控制在0.33左右,可使反应转化率增加20%左右。以1 g棕榈酸、0.67 g异辛醇、0.12 g固定化脂肪酶和3 mL棕榈酸异辛酯组成的反应系统在40℃条件下敞口反应24 h,酯化率可达97.5%,固定化酶连续反应30批后酯化率仍能达到95%以上。
- 李辛陈必强谭天伟
- 关键词：棕榈酸异辛酯固定化酶
