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排序方式：

莱航鸡rDNA重复基因家族的克隆: 2007年; 动物rDNA基因是一种GC含量较高、结构复杂的重复序列。通过结合生物信息学技术,经反复摸索后选用LAPCR法扩增莱航鸡rDNA基因重复序列,经测序鉴定最终克隆了莱航鸡的3个rDNA基因及其2个间隔序列。研究对克隆复杂DNA序列时引物设计的特别规则、反应体系的改进、DNA聚合酶的选用、循环参数的调整等进行了探索。; 唐冬生李芳张勇蒋泓胡大林张细权李月琴周天鸿; 关键词：RDNA基因基因克隆

人工锌指核酸酶的设计与表达纯化: 2008年; 设计表达了4个锌指核酸酶,用于切断人基因组中的rRNA基因家族的内部转录间隔序列,造成双链断裂,以此提高针对多位点基因打靶的效率,为后续基因打靶应用于基因治疗研究奠定基础。首先,在人rRNA基因家族ITS1序列中找到2个合适的9 bp长的序列(中间间隔6bp)为锌指蛋白识别位点,根据识别位点序列每个位点分别设计2个三锌指蛋白。通过设计引物进行重叠延伸PCR得到全长编码锌指蛋白的DNA,分别克隆到表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-ZFP,转化大肠杆菌RossettaTM(DE3),实现带组氨酸标签的锌指融合蛋白的表达与纯化。同时,将限制性内切酶FokI的切割结构域分别与4个锌指蛋白序列采用PCR拼接后克隆到表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-ZFN,转化到大肠杆菌RossettaTM(DE3),实现带组氨酸标签的锌指核酸酶融合蛋白的表达并纯化。; 蒋泓曾芳王克振梁沂梅李月琴张细权周天鸿唐冬生; 关键词：锌指核酸酶生物合成纯化基因打靶基因治疗

人工锌指核酸酶诱导的多位点基因打靶的研究: 引言基因打靶的同源重组发生率很低,难以满足基因打靶的应用要求。锌指核酸酶可以诱导DNA特定位点的双链断裂,从而大大提高同源重组的发生率。本研究小组建立了一种以rRNA基因间的内部转录间隔序列为; 唐冬生蒋泓曾芳王克振黄永芬梁沂梅张细权; 关键词：基因打靶锌指核酸酶转基因动物; 文献传递

奶牛胎儿细胞多位点基因打靶的研究被引量：4: 2008年; 利用奶牛rDNA基因间的ITS重复序列作为靶位点,对奶牛胎儿成纤维细胞进行多位点基因打靶,建立以重复序列为靶位点的多位点基因打靶技术,并为克隆定点转基因奶牛提供核供体。首先分离培养出奶牛胎儿成纤维细胞,并进行性别鉴定和核型分析。采用MTT比色法确定了G418和GCV正负筛选的最低有效浓度。然后通过多位点基因打靶载体转染、正负筛选获得7个表达绿色荧光的克隆细胞系,经PCR,RT-PCR和测序证实其中1个细胞系为定点整合的克隆细胞系,且GFP基因表达。; 唐冬生刘广振刘东军蒋泓龚道元马玉珍杨东山梁浩张细权; 关键词：奶牛胎儿成纤维细胞基因打靶

锌指蛋白在多位点基因打靶中的应用被引量：1: 2008年; 综述了锌指蛋白的功能特性.可以与切割DNA的无特异性切割结构域组成人工锌指核酸酶,可以造成细胞染色质指定序列特异性双链断裂,促使细胞启动重组修复机制,在诱导产生的重组酶的作用下,可以将外源基因片段重组插入染色质的效率提高上万倍。锌指蛋白技术与多位点基因打靶技术相结合,可以在不需药物筛选的情况下,进行人体细胞基因治疗。; 蒋泓唐冬生; 关键词：锌指蛋白锌指核酸酶基因打靶基因治疗

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国家自然科学基金(30671194)