国家自然科学基金(81160503)
- 作品数：14 被引量：52H指数：4
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- 谷胱甘肽对α-芋螺毒素LtIA氧化折叠的影响
- 2012年
- 目的探究氧化型谷胱甘肽(GSSG)与还原型谷胱甘肽(GSH)不同比例对α-芋螺毒素LtIA氧化折叠过程的影响。方法本实验采用Fmoc固相合成法,合成线性α-芋螺毒素LtIA,而后在Tris-HCl缓冲液中氧化折叠,形成含有天然结构的毒素肽。在氧化折叠过程中,我们设置了氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽不同的比例,观察其对LtIA氧化折叠过程的影响。结果氧化型谷胱甘肽对折叠反应影响明显,能够显著提高折叠反应的速率和产率。结论随着还原型谷胱甘肽比例增加,天然肽的折叠产率有一定程度降低。
- 王蕊吴勇罗素兰长孙东亭
- 关键词：谷胱甘肽
- 丝线、羊肠线及结扎道数对大鼠CCI疼痛模型的影响被引量：2
- 2013年
- 通过比较丝线、羊肠线2种不同材料和不同结扎道数对大鼠CCI疼痛模型痛阈值的影响,优化筛选出更易在实验过程中普及的技术方法 .将42只SD雄性大鼠随机分成7组,包括结扎丝线4道、3道与2道3个组;结扎羊肠线4道、3道与2道3个组和1个假手术组,每组6只大鼠.铬制羊肠线和丝线分别结扎大鼠左侧坐骨神经2道、3道、4道;假手术组只暴露左侧坐骨神经,不进行结扎处理.建模成功后测量各组大鼠的机械性缩足反应阈值(MWT),发现丝线3道、4道组和羊肠线2道、3道、4道组与假手术组和自身基础的MWT有极显著差异(P<0.01);假手术对照组、丝线2道组与各组自身基础的MWT之间没有差异(P>0.05),结扎手术前后的MWT之间差异显著,结扎后第7天、14天和21天的MWT之间没有差异.羊肠线3组之间没有显著性差异(P>0.05).由此可得出结论:羊肠线2道、3道、4道组,以及丝线3道、4道组均能产生稳定的神经痛,根据MWT的数值大小和是否出现自噬现象可认为,以羊肠线结扎2道组最好,不但MWT的数值小,且操作简便又节省时间,可作为大鼠CCI建模的首选方法 .
- 沈立姿房立丛于津鹏胡远艳朱晓鹏高炳淼罗素兰长孙东亭
- 关键词：丝线
- 两种给药途径注射吗啡对大鼠CCI模型的影响被引量：2
- 2013年
- 通过建立坐骨神经慢性挤压伤模型(Chronic Constriction Injury model,CCI模型),运用鞘内和腹腔给药技术,对比了2种给药途径单次注射不同剂量的吗啡对CCI大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)的影响.结果显示,单次鞘内注射吗啡1μg·kg-1,给药后1 h和3 h,在大鼠CCI模型上的镇痛作用与单次腹腔注射吗啡1 mg·kg-1的镇痛作用相当,与单次腹腔注射吗啡0.5 mg·kg-1和0.1 mg·kg-1的镇痛作用具有显著性差异(P<0.05).这表明鞘内注射吗啡在大鼠CCI镇痛模型上具有用量小、效果好等优点,对于筛选产量小、难提取,但作用效果明显的镇痛药物具有明显的优越性.
- 房立丛沈立姿于津鹏朱晓鹏胡远艳张本罗素兰长孙东亭
- 关键词：鞘内置管给药途径
- 乙酰胆碱结合蛋白的特点及应用
- 2013年
- 乙酰胆碱结合蛋白(acetylcholine-binding proteins,AChBPs)的基本特征、结构特点和激活机制与烟碱型乙酰胆碱受体(the nicotinic acetylcholine recepror,nAChRs)相似.通过对AChBPs晶体结构与功能的研究,能准确阐明nAChRs结构与功能的关系.通过对配体和AChBPs的复合物的晶体结构解析,有助于我们理解配体与nAChRs相互作用的机理,为开发治疗疼痛、成瘾、帕金森症、阿尔茨海默氏症和癫痫等疾病的新药提供理论基础.
- 林波高炳淼孟海玲邴晖吴勇长孙东亭罗素兰
- 关键词：烟碱型乙酰胆碱受体晶体结构
- 利用SMART技术构建疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库及芋螺毒素新基因的克隆被引量：4
- 2012年
- 利用RNA 5'末端移动反转录(switching mechanism at 5'end RNA transcription,SMART)技术构建及鉴定疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,克隆新型芋螺毒素基因.提取疣缟芋螺毒管总RNA,用RT-PC反转录成单链cDNA(single-stranded cDNA,ss-cDNA),长距离PCR(long-distance PCR,LD-PCR)扩增合成双链cDNA(double-stranded cDNA,ds-cDNA),依次用蛋白酶K和SfiⅠ酶进行酶切孵育,用CHROMA SPIN-400柱进行分级分离.得到的ds-cDNA与λTripIE×2噬菌体载体体外连接并体外包装,感染大肠杆菌E.coli XL1-blue,测定原始文库滴度和重组率.进行文库扩增,测定扩增文库滴度.用PCR鉴定插入cDNA片段的大小,构建的疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体原始文库滴度为1.47×106pfu/mL,重组率为90.72%,扩增文库的滴度为4.07×108pfu/mL,插入cDNA片段为200～1 200 bp.利用SMART技术成功构建了疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库并克隆出新型芋螺毒素基因,为芋螺毒素基因的筛选和鉴定奠定了基础.
- 李宝珠高炳淼吴勇于津鹏吴潇洒罗素兰长孙东亭
- 关键词：噬菌体CDNA文库SMART技术
- 乙酰胆碱受体α4β2亚型在非洲爪蟾卵母细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 通过建立乙酰胆碱受体α4β2亚型(α4β2 nAChR)在非洲爪蟾卵母细胞中的表达模型,以便以α4β2 nAChR为作用靶点进行药物筛选。将乙酰胆碱受体亚基基因α4、β2体外转录获得的cRNA,通过显微注射的方法注入非洲爪蟾卵母细胞,并对该受体的表达情况进行检测。结果显示,乙酰胆碱受体α4β2亚型在蛙卵细胞中获得了有效表达,记录到典型的ACh配体门控的离子通道内向电流。
- 于海鹏李宝珠房立丛沈立姿朱晓鹏胡远艳张本长孙东亭罗素兰
- 关键词：非洲爪蟾卵母细胞受体基因表达
- 钠离子通道研究进展被引量：11
- 2012年
- 细胞电活动是生命现象的基本特征之一,而离子通道是其结构和功能的基础。因此,研究离子通道作用机制具有重大的理论和现实意义。许多神经系统和心血管疾病,如多发性硬化症、癫痫、脑溢血、神经痛、Brugada综合征(BrS)、进行性心脏传导缺陷(PCCD)和原发性心室纤颤(IVF)等,都与钠离子通道氨基酸序列和结构发生的改变有关。该文对钠离子通道的研究进展进行综述。
- 李宝珠高炳淼吴勇于津鹏吴潇洒长孙东亭罗素兰
- 关键词：钠离子通道研究方法
- 海南产T-超家族芋螺毒素B8．1T合成及活性分析被引量：1
- 2013年
- 从海南产桶形芋螺中发现了一个新的T-超家族芋螺毒素B8.1T,其氨基酸序列为DCCPESPPCCH,具有两对二硫键,其连接方式为Cys2-Cys9,Cys3-Cys10。首先采用N-9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成法合成了B8.1T线性肽,根据采用半胱氨酸保护基团的不同,探索了3种不同的氧化方法 :(1)两步氧化法;(2)One-pot方法 ;(3)自由氧化法。同时对提高芋螺毒素氧化折叠效率的条件进行了优化,对B8.1T的生物活性进行了初步的研究。结果表明,3种方法都可合成正确折叠的芋螺毒素B8.1T,其中两步氧化法和One-pot法合成效率高于自由氧化法,自由氧化折叠条件的优化表明,折叠反应添加物等能提高正确折叠产物的积累效率。B8.1T的动物活性试验显示,当对小鼠进行颅内给药时,对其行为活动产生抑制效应,而对肌肉给药的金鱼无明显影响。
- 吴勇吴潇洒长孙东亭罗素兰
- 关键词：固相多肽合成
- 肌肉型乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞中的表达
- 2013年
- 建立肌肉型乙酰胆碱受体(胎儿型α1β1δγ和成年型α1β1δε)在非洲爪蟾卵母细胞中的表达模型,用于以这两种受体为靶点的药物筛选。将肌肉型乙酰胆碱受体的各个亚基基因在体外转录获得各自的cRNA,显微注射到非洲爪蟾卵母细胞中,利用双电极电压钳技术检测其表达情况,并确定不同浓度的乙酰胆碱对胎儿型α1β1δγ和成年型α1β1δε受体电流表达情况的影响。在卵母细胞中成功表达两种肌肉型乙酰胆碱受体;当乙酰胆碱浓度为1μmol/L时,α1β1δγ和α1β1δε受体电流很小,不能用于后续的检测试验,当浓度为5μmol/L时,完全激活α1β1δγ受体的开放电流达到最大6025 nA,当浓度为20μmol/L时,完全激活α1β1δε受体的开放电流达到最大2 742 nA,只注射ddH2O的对照组细胞则没有任何电流产生。该受体模型的成功建立,为筛选作用于肌肉型乙酰胆碱受体的药物提供了实验模型。
- 沈立姿于津鹏房立丛朱晓鹏胡远艳罗素兰长孙东亭
- 关键词：膜片钳非洲爪蟾卵母细胞显微注射
- 外源基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达被引量：20
- 2011年
- 随着杆状病毒载体和筛选方法的不断改进,通过Bac-to-Bac方法可以使杆状病毒最大重组率达到100%,缩短了构建重组载体的时间,极大提高了工作效率。另外,研究者开发了一些新的宿主域扩大的昆虫杆状病毒载体,能够在家蚕或蛹内进行高水平表达重组蛋白。昆虫杆状病毒表达系统具有完备的翻译后加工修饰功能和高效表达外源蛋白的能力等特点,是一种非常理想的真核表达系统。利用该表达系统现已成功表达了约千种外源蛋白。以重组杆状病毒为载体的昆虫表达系统、外源基因在该表达系统中的表达情况及在农业领域中的应用进行了介绍。
- 高炳淼李宝珠于津鹏胡远艳长孙东亭罗素兰
- 关键词：杆状病毒外源基因重组蛋白昆虫细胞
