广西省自然科学基金(0640085)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
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- E2F-1真核表达载体的构建和Genectin抗性细胞的筛选
- 2010年
- 目的通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株。方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选。用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株。RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况。结果重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致。获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增。RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1。结论成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础。
- 王长青尹永硕李雷谢玉波肖强
- 关键词：E2F-1胃肿瘤MGC-803细胞转染
- E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察被引量：8
- 2008年
- 目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响。结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072。结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用。
- 马玉林肖强谢玉波李雷
- 关键词：胃肿瘤转染
- RNA干扰E2F-1表达对胃癌MGC803细胞生物学行为的影响及其机制被引量：6
- 2009年
- 目的利用基因表达谱芯片技术探讨E2F-1小分子干扰RNA（E2F-1-siRNA）影响胃癌细胞MGC803生物学行为的分子机制。方法分别抽取E2F-1-siRNA转染组和对照组（negative control—siRNA）的细胞总RNA，分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子（Cy3／Cy5）标记cDNA探针，与含有21522条人类22k基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan 10K／A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号，应用LuxScan3．0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析。结果在21522条基因中，两组胃癌细胞间差异性表达基因为18条，其中上调基因8条，下调基因10条，下调的基因中有1条功能信息不明。结论体外干扰E2F-1基因表达后，胃癌MGC803细胞生物学行为的变化是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果，其中的关键基因和信号传导通路值得进一步研究。
- 苑汐子尹永硕李雷谢玉波王晓通肖强
- 关键词：胃癌RNA干扰基因芯片基因表达
