国家自然科学基金(U1204311)
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
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- 视网膜血管老化与动脉粥样硬化形成的相关性
- 2019年
- 目的:探讨老年血管老化与动脉粥样硬化形成的相关机制,为老年急性致盲性疾病及动脉粥样硬化症的发生提供实验依据.方法:利用免疫组织化学方法和明胶墨汁灌流,显示成年和老年小鼠视网膜血管、小胶质细胞及白介素-1β(IL-1β)和动脉粥样硬化标志物单核细胞趋化因子1(MCP-1)阳性细胞发育和老化状况.结果:与成年小鼠相比,视网膜老化后血管体密度明显下降;小胶质细胞数量增加,体积变小,细胞表面突起的数量也明显减少;MCP-1在发生动脉粥样硬化组织的炎性细胞聚集处高度表达,在老化的视网膜中,MCP-1阳性细胞荧光强度增强,提示小鼠视网膜发生了动脉粥样硬化.老年视网膜IL-1β阳性细胞体积变大,数量增加,伴随大量星形胶质细胞的转化激活.结论:视网膜发生老化时,血管体密度的下降、小胶质细胞的激活和炎症因子的分泌促进了视网膜血管老化的发生和动脉粥样硬化的形成.
- 杨蕤郡李瑞萍王小青邓锦波
- 关键词：动脉粥样硬化白介素-1Β单核细胞趋化因子1视网膜血管老化血管网
- 阿尔茨海默病合并2型糖尿病与海马损伤——从应激反应到自噬产生被引量：5
- 2015年
- 目的 研究氧化应激、细胞增殖、自噬在阿尔茨海默病合并2型糖尿病（AD＋ T2DM）中的相互关系,探讨自噬在AD＋ T2DM中的作用.方法 建立T2DM、AD及AD＋ T2DM小鼠模型,实验共分为4组：对照组、T2DM组、AD组和AD＋ T2DM组,每组20只小鼠,共计80只小鼠.通过水迷宫实验观察小鼠的学习记忆能力;测定小鼠空腹血糖值,用酶学法检测血清胰岛素浓度来计算小鼠胰岛素抵抗指数;应用免疫荧光染色法检测胰岛素受体底物2、氧化应激、细胞增殖及自噬变化情况,同时采用透射电子显微镜观察自噬发生的超微结构,Western印迹技术半定量分析自噬发生程度.结果 与对照组小鼠相比,在第4天时,T2DM组、AD组及AD＋ T2DM组在水迷宫实验中找到平台的时间延长[分别为（26.08±4.93）s、（38.46 ±4.07）s、（47.32 ±5.86）s、（53.01 ±6.12）s,F=2.454,P=0.025],AD± T2DM组用时比AD组更长（t=-3.624,P=0.033）;与对照组相比,T2DM组、AD组及AD± T2DM组分别出现了不同程度胰岛素抵抗（4.35 ±0.48、16.12 ±3.57、7.03±3.11、18.78±5.06,F=5.602,P=0.009）;各组间通过免疫组织化学染色及Western印迹半定量分析比较,T2DM、AD及AD＋ T2DM组胰岛素受体底物2表达减少、氧化应激表达增多、细胞增殖受到抑制、自噬表达上调（分别为F=418.344、222.514、436.250、113.934、23.772、35.469,均P＜0.05）,而AD＋ T2DM组比AD组趋势更明显（分别为t=-2.796、21.723、-8.041、9.037、-4.403、-32.011、-26.593,均P ＜0.05）.结论 AD＋ T2DM组认知功能障碍比AD组及T2DM组严重;AD＋ T2DM诱导氧化应激损伤发生,氧化应激上调抑制了细胞增殖,进一步诱导自噬发生.
- 郭俊楠张俊士贺维亚鄢明超胡桑梁爽邓锦波
- 关键词：阿尔茨海默病海马氧化性应激自噬
- MitoTracker对在体小鼠小脑和体外培养颗粒细胞线粒体的染色方法被引量：1
- 2016年
- 目的：采用线粒体红色荧光探针MitoTracker标记小脑颗粒细胞线粒体，并与标记体外培养神经元线粒体进行比较，探讨MitoTracker标记在体脑细胞线粒体的实验方法。方法：在脑立体定位仪下，微量注射MitoTracker线粒体红色荧光探针到小鼠小脑皮质，继续饲养3d后，常规取脑、固定、切片，利用共聚焦显微镜观察线粒体标记情况。结果：共聚焦显微镜下，可观察到在体标记的神经细胞内颗粒样线粒体呈团块状分布，排列较体外培养神经元标记的杆状线粒体紧密。结论：MitoTracker线粒体红色荧光探针可用于标记在体小脑细胞的线粒体。
- 王小青王淑曼王来鄢明超邓锦波
- 关键词：微量注射线粒体
- Reeler小鼠皮质片层化及细胞极性化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨Reelin在皮质片层化形成及细胞分化、极性化中的作用及相关机制。方法取reeler小鼠和野生型(WT)小鼠受孕17 d(E17)至出生21d(P21)各年龄点脑部共96例。免疫荧光标记技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法检测两组小鼠大脑发育中放射状胶质细胞、增殖的神经干细胞及极性蛋白的表达,并使用Nissl染色技术及Di I示踪技术分别对新皮质分子层发育、海马CA1区锥体细胞极性方位以及皮质锥体细胞极性程度进行统计。结果 Reeler小鼠大脑发育中齿状回内放射状胶质细胞数量减少,极性紊乱,Brd U阳性细胞散在分布,数量减少;由于极性细胞未得到适当的终止信号越过皮质Ⅱ层进入分子层,皮质片层化紊乱;大脑皮质及海马锥体细胞极性发生改变。结论 Reelin在神经细胞迁移、神经元增殖和皮质片层化的过程中发挥重要作用,尤其对锥体细胞极性起着至关重要的影响。
- 穆小云厉永强梁爽时书勤付苏邓锦波
- 关键词：REELIN免疫荧光
- 孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触改变的影响被引量：4
- 2015年
- 目的建立亚硝酸盐暴露模型,探讨孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触数量的影响及其改变机制。方法采用免疫荧光染色法观察对照组和模型组(低剂量组与高剂量组)子鼠出生后0d(P0)、P7、P14、P30的的视皮质突触素(SYN)和γ突触核蛋白(γ-synuclein)的改变,利用Western blotting和水迷宫实验对SYN蛋白的表达进行进一步验证。结果横向比较(剂量)发现,亚硝酸盐暴露组SYN减少(P<0.05)而γ-synuclein阳性细胞增多(P<0.05),且与亚硝酸盐存在剂量依赖关系(P<0.05)。纵向比较(年龄)发现,P0、P7、P14、P30 SYN表达随着年龄增长而增多(P<0.05),γ-synuclein表达减少(P<0.05),剂量(MS=2.00,F=55.22,P<0.05)与年龄(MS=1.11,F=30.68,P<0.05)之间存在交互作用且剂量的影响作用更大。Western blotting和水迷宫实验结果与免疫荧光统计结果一致。结论孕期亚硝酸盐暴露会影响子代视皮质突触的发育,减少突触数量,且对其影响与亚硝酸盐暴露剂量存在依赖关系,而γ突触核蛋白的过度表达可能是突触丢失的主要原因。
- 李瑞玲陈永芳王颖董红静时书勤邓锦波邓洁心
- 关键词：突触视皮质免疫印迹法小鼠
- 缺血、缺氧对小鼠海马DNA甲基化的影响被引量：8
- 2016年
- 目的建立缺血、缺氧脑片模型,探讨缺血、缺氧对小鼠海马的损伤及其机制。方法利用C57BL/6J小鼠建立海马脑片缺血、缺氧性脑损伤(HIBD)模型,采用免疫组织化学染色法和Western blotting法分析正常对照组海马脑片与HIBD实验组海马脑片炎症损伤、DNA甲基化相关酶的表达情况。结果 HIBD实验组海马脑片氧化应激、炎症损伤细胞明显多于对照组(P<0.01),诱发海马应激损伤;同时HIBD实验组海马脑片DNA甲基化水平高于对照组(P<0.01)。结论脑片缺血、缺氧可促发炎症反应对海马组织造成损伤,DNA甲基化水平升高,提示DNA甲基化可能参与缺血、缺氧组织损伤过程;机制可能是HIBD影响DNA代谢活动,诱导DNA甲基化水平升高,DNA甲基化调控相关基因表达产生氧化应激,促发炎症反应,对海马造成损伤。
- 李红石贞玉李瑞玲张裴付苏邓锦波邓洁心
- 关键词：缺血缺氧炎症损伤DNA甲基化海马脑片小鼠
- Reelin在小鼠穿通纤维及大脑连合纤维寻径中的作用
- 2017年
- 目的通过对比野生型小鼠和Reeler小鼠穿通通路及连合纤维的发育,探讨Reelin在穿通通路及连合纤维寻径中的作用。方法共取野生型小鼠(WT)和Reelin基因缺失小鼠(Reeler),从胚龄16 d(E16)至出生7d(P7)各年龄点,共123例。采用Di I/Di O离体示踪技术对不同年龄点的WT小鼠及Reeler小鼠的穿通通路及连合纤维进行顺行和逆行示踪。结果 1.穿通通路主要由内嗅皮质第Ⅱ层和第Ⅳ层神经元所发出,在E16时进入海马腔隙分子层,P1时穿通纤维出现在齿状回,P7时穿通纤维形成致密纤维束终止于齿状回外分子层2/3;Reeler小鼠的穿通通路出现明显的发育延迟并且投射纤维分布紊乱;2.穹隆连合纤维主要由海马CA3锥体细胞,门细胞及内嗅皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元发出,在E16时形成;Reeler小鼠穹隆纤维与WT小鼠在发育中无明显区别;3.胼胝体连合纤维主要由新皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元及纹状体神经元所投射,在E18时形成并向对侧皮质进行纤维投射,并且投射部位出现对称分布,P3时一侧胼胝体纤维到达对侧纹状体。Reeler小鼠胼胝体投射的皮质神经元向对侧新皮质投射出现延迟。结论 Reelin可能是穿通通路及连合纤维发育的导向因子。Reelin的缺失导致穿通通路发育延迟,并且连合纤维在皮质的细胞来源及穿通通路细胞来源紊乱。
- 王晨阳王强李瑞萍孙仪征石贞玉邓锦波
- 关键词：REELIN发育小鼠
- 慢性寒冷暴露与线粒体数量改变被引量：1
- 2017年
- 目的建立慢性寒冷暴露模型,观察冷应激对线粒体数量、形态学调控蛋白及生物合成的影响并对其机制进行初步探讨。方法选取8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为对照组和寒冷组,每组各20只。寒冷组于-4~0℃环境中饲养4周建立慢性寒冷暴露模型。采用Mito Tracker在体标记小脑皮质颗粒细胞线粒体的方法统计线粒体的数量,同时应用免疫荧光染色法和Western blotting技术,检测线粒体分裂、融合蛋白及转录辅激活因子过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)的表达情况。结果与对照组相比,寒冷组线粒体数量增多(P<0.01),线粒体分裂、融合蛋白及转录辅激活因子PGC-1α表达均显著增多(P<0.01)。结论慢性寒冷暴露可能通过诱导PGC-1α的高表达增强线粒体生物合成,增加线粒体数量;活化的PGC-1α协同冷应激促进线粒体形态学调控蛋白表达,构建新的分裂和融合的动态平衡,为机体适应低温环境提供高效率的产能机制。
- 王小青李瑞萍孙仪征王来邓锦波
- 关键词：寒冷小脑皮质颗粒细胞线粒体生物合成免疫印迹法
- Reelin在中枢神经系统进化过程中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨Reelin在中枢神经系统进化过程中所起的作用及其调节机制。方法取Reelin基因缺失小鼠(Reeler)和野生小鼠(WT),胚龄16d(E16)至出生30d(P30)各年龄点,共192例。利用免疫荧光技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法,检测两组小鼠中大脑皮质、海马、脊髓发育过程中放射状胶质细胞、神经干细胞、增殖细胞及星形胶质细胞的表达,并使用Nissl染色技术,分别对脊髓、海马、大脑皮质的组织学特征进行观察。结果脊髓发育过程中,神经细胞仅发生1次迁移,并形成套层,套层进而衍变成呈H型脊髓灰质。与野生型小鼠相比,同年龄Reelin基因缺失小鼠(Reeler小鼠)在形态结构、细胞迁移方面与野生型小鼠基本类似,但增殖的神经细胞数目明显减少。在第1次迁移的基础上,海马的形成还需经历第2次神经细胞迁移,最终形成了双"C"字型结构的锥体细胞层和颗粒细胞层;与野生型小鼠相比,在形态上Reeler小鼠锥体细胞层明显扩散劈裂为两层,齿状回颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移以致颗粒层与门区的界限消失,形成鼓槌状结构;同时,增殖的神经细胞数目减少,放射状胶质细胞排列紊乱。新皮质的形成也需经历两次迁移,但第2次神经细胞迁移所形成的皮质板按照由内向外的迁移方式继续发育为界限清晰的6层结构;与野生型小鼠相比,同年龄点Reeler小鼠新皮质片层化结构紊乱,增殖的神经细胞和放射状胶质细胞数目均有所减少,并且放射状胶质细胞排列紊乱。结论脊髓、海马和新皮质分别代表了进化过程中的管状神经、古皮质和新皮质,Reelin可能是皮质进化的关键分子。Reelin参与了第2次迁移以及新皮质皮质板的继续分层,Reelin缺失可以引起上述皮质形态和结构的变化,尤其是古皮质和新皮质。
- 赵培文鄢明超李瑞玲付苏王靓王晨阳邓锦波
- 关键词：REELIN细胞增殖细胞迁移免疫荧光
- DiI示踪标记固定脑组织内神经元及其突起的方法被引量：1
- 2015年
- 目的：对DiI标记固定大脑皮质内神经元及其突起的技术进行改进,使操作更简单、便捷,效果更为高效、理想.方法：将DiI颗粒植入已固定小鼠大脑胼胝体,然后将标记后的脑组织放入4％多聚甲醛固定,于室温下避光孵育1～2周.结果：这种标记方法可以很直观地显示出大脑皮质神经元及其突起的精细结构,其中包括树突棘.结论：DiI示踪标记法可以用于标记固定脑内的神经元及其突起和树突棘,效果令人满意.
- 穆小云梁爽付苏陈永芳吴萍邓锦波
- 关键词：DII锥体细胞神经元突起胼胝体
