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国家自然科学基金(81160502)

作品数：8 被引量：25H指数：4
相关作者：赵爽许燕董栩叶鑫邸亮更多>>
相关机构：云南中医学院安徽中医药大学第一附属医院云南中医药大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金云南省自然科学基金云南省教育厅自然科学研究基金更多>>
相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 2篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 6篇克隆
  • 5篇基因
  • 5篇基因克隆
  • 4篇重楼
  • 3篇滇重楼
  • 3篇原核表达
  • 2篇药用
  • 2篇药用植物
  • 2篇荧光
  • 2篇荧光定量
  • 2篇原核
  • 2篇蜘蛛香
  • 2篇植物
  • 2篇生物信息
  • 2篇生物信息学
  • 2篇生物信息学分...
  • 2篇基因表达
  • 1篇荧光定量PC...
  • 1篇实时荧光
  • 1篇实时荧光定量

机构

  • 7篇云南中医学院
  • 1篇安徽中医药大...
  • 1篇云南中医药大...

作者

  • 7篇赵爽
  • 4篇许燕
  • 4篇董栩
  • 1篇李月亭
  • 1篇李国栋
  • 1篇叶鑫
  • 1篇邸亮
  • 1篇马腾

传媒

  • 3篇时珍国医国药
  • 2篇中药材
  • 1篇中草药
  • 1篇云南中医中药...
  • 1篇安徽医药

年份

  • 2篇2019
  • 2篇2017
  • 2篇2016
  • 1篇2014
  • 1篇2013
共 8 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
滇重楼全长cDNA文库的构建及初步分析被引量：4
2014年
目的:构建滇重楼全长cDNA文库,为进行滇重楼生长发育相关基因及次生代谢产物合成途径相关基因的研究奠定基础。方法:改良Trizol法提取滇重楼根茎总RNA,通过SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)构建全长cDNA文库,测定分析文库滴度、重组率及插入片段大小,对文库进行随机测序并通过Blastx分析后在GenBank中进行同源性检索和功能预测。结果:文库的库容为2.5×107cfu/mL,文库重组率98.5%,插入片段大小平均为1.5 kb。随机挑取192个单克隆测序,其中有149条ESTs(Expressed Sequence Tags),其中9条序列与生长发育有关,5条序列与滇重楼次生代谢产物的合成、运输与代谢有关。结论:利用SMART技术成功构建了滇重楼全长cDNA文库,该文库库容量大、重组率高且插入的cDNA片段较长,可以满足滇重楼功能基因的鉴定、筛选及表达调控研究。
赵爽董栩马腾
关键词：滇重楼全长CDNA文库SMARTESTS
滇重楼鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达研究被引量：8
2017年
目的克隆滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis三萜皂苷生物合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行原核表达。并用Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1基因和SE2基因的相对量。方法以滇重楼根为材料提取总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板,根据转录组数据中的2组SE基因全长序列设计特异性引物,对SE基因进行克隆后转入到pEASY-T1 Simple Cloning Vector中,经测序鉴定正确后,构建pEASY-E1-SE表达载体,利用Art Media protein Expression/Amp+培养基自动诱导表达。Real-time PCR法检测cDNA样本中SE1和SE2基因的相对量。结果获得了2条滇重楼SE基因,命名为ppSE1和ppSE2。ppSE1的全长为1 932 bp,开放阅读框(ORF)为1 578 bp,编码525个AA;ppSE2的全长为1 828 bp,ORF长为1 548 bp,编码515个氨基酸。荧光定量PCR结果显示ppSE1基因和ppSE2基因在茎和叶中的表达具有显著差异,ppSE1的表达在叶中最为显著。酶切和测序结果表明,原核表达载体pEASY-E1-SE构建成功;SDS-PAGE分析显示,在BL21(DE3)表达感受态细胞中成功诱导表达了SE基因的2种融合蛋白。结论克隆了滇重楼的SE基因,获得了在体外具有生物学活性的SE蛋白。ppSE1基因和ppSE2基因在滇重楼中具有不同的表达模式,在滇重楼次生代谢产物的合成中起着不同的作用。
许燕赵爽董栩叶鑫
关键词：滇重楼基因克隆原核表达荧光定量PCR
药用植物中细胞色素P450基因的研究进展被引量：5
2016年
细胞色素P450(cytochrome P450)广泛存在于动物、植物、细菌、真菌等细胞内。是一类与内质网、线粒体、质体高尔基体等细胞器结合的以血红素为辅基的B族细胞色素超基因家族蛋白酶,该酶在植物体内担当着相当重要的功能,在植物体中催化着多种初级代谢反应和次级代谢反应,对黄酮类、香豆素、异黄酮类氰苷、生物碱、萜类等的合成以及降解外源化学药物毒性等方面有重要作用。本文通过介绍该基因在药用植物刺五加、北柴胡、蓖麻、茶树、黄花蒿等植物的克隆和表达以及表达量的测定实验技术,为从其他植物中克隆P450基因提供方法和依据,并对后续研究提供参考。
董栩许燕李月亭赵爽
关键词：药用植物P450基因克隆实时荧光定量
药用植物中鲨烯环氧酶基因的研究进展被引量：5
2016年
鲨烯环氧酶(SE)存在于内质网的微粒体中,在鲨烯转变为环氧化鲨烯的生物过程中作为生物催化剂起催化作用。而环氧化鲨烯是从鲨烯生成环阿屯醇、香树素、羊毛甾醇等的过程中重要的中间产物。SE的活性决定了环氧化鲨烯的生物合成的效率,继而,以环氧化鲨烯作为前体的各类甾体皂苷、三萜皂苷、甾醇等化合物的生物合成也随之受其影响,后续产物的产量取决于它的含量和活性。因此SE被认为是甾体皂苷生物合成途径中的一个非常重要的调控酶,已在多种植物中克隆出并进行了初步功能鉴定。该文概述几个重要药用植物的SE基因的克隆及原核表达,为从其他药用植物中克隆SE基因提供一定的参考依据及方法思路。
许燕赵爽邸亮
关键词：基因克隆原核表达
四种提取重楼根茎总RNA方法的研究被引量：3
2013年
目的探索重楼根茎总RNA提取的最佳方法。方法以重楼根茎为材料,比较研究了4种不同的RNA抽提方法如改良Trizol法、异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法提取总RNA的效果。结果改良Trizol法提取的重楼根茎总RNA的电泳条带清晰,RNA完整性好,A260/A280比值在1.8～2.0之间,A260/A230比值在2.0～2.3之间,能够满足一般的分子操作要求;但异硫氰酸胍法、改良CTAB法和SDS法所提取的根茎总RNA有明显的DNA或蛋白质污染,并且均有一定程度的降解。结论改良Trizol法方便、快捷、高效,可有效地从富含多酚和多糖的重楼根茎中分离出高质量RNA,为重楼进行基因克隆、cDNA文库构建等分子生物学研究奠定基础。
赵爽潘少丽
关键词：重楼根茎RNA提取
滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究被引量：1
2017年
目的为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的s PPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究。方法根据滇重楼c DNA文库中筛选到的s PPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将Pps PPase插入到原核表达载体p EASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行诱导表达。结果滇重楼中Pps PPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高为94%;Pps PPase编码的蛋白相对分子质量是23.4k Da,理论等电点p I为5.6,特异识别区域即位于98-104位之间即DNDPMDV。成功构建了原核表达载体p EASY-E1-Pps PPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大肠杆菌中能够表达,当IPTG诱导2h时表达量较高。结论首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考。
赵爽董栩许燕李国栋
关键词：滇重楼基因克隆原核表达
蜘蛛香香叶醇-10-羟化酶基因的克隆及表达分析被引量：2
2019年
目的:克隆蜘蛛香香叶醇-10-羟化酶(geraniol-10-hydroxylase,G10H)基因,并对其进行生物信息学和基因表达量分析。方法:在已测得蜘蛛香转录组数据的基础上,设计全长特异引物,克隆出G10H基因全长,运用生物信息学进行基因序列同源性分析,并对编码蛋白进行各种理化性质分析。运用实时荧光定量PCR检测该基因在蜘蛛香不同部位的相对表达量,并利用茉莉酸甲酯处理蜘蛛香植株后,分时间取成熟叶片进行诱导表达分析。结果:从蜘蛛香中克隆得到了长度为1 500 bp的G10H基因(VjG10H)完整开放阅读框的cDNA序列,编码499个氨基酸。VjG10H编码的蛋白相对分子质量是55.92 kDa,理论等电点为7.61。实时荧光定量PCR检测结果表明,VjG10H基因在成熟叶中表达量最高,其次是根茎中,在新生叶中表达量最低;VjG10H对茉莉酸甲酯的诱导表现出敏感,茉莉酸甲酯诱导处理48 h后基因的表达水平达到最高。结论:成功从蜘蛛香植株中克隆得到可能参与环烯醚萜生物合成途径中的关键酶G10H基因。
赵爽董婷婷唐红
关键词：蜘蛛香基因克隆生物信息学分析基因表达
蜘蛛香GES基因的克隆与生物信息学及基因表达分析被引量：2
2019年
目的克隆蜘蛛香香叶基合酶(Geraniol synthase,GES)基因,并对其进行生物信息学和基因表达量分析。方法在已测得蜘蛛香转录组数据的基础上,设计全长特异引物,克隆出GES基因全长,运用生物信息学进行基因序列同源性分析,并对编码蛋白进行各种理化性质分析。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测该基因在蜘蛛香不同部位的相对表达量,并利用茉莉酸甲酯(MeJA)处理种植的蜘蛛香植株后,分时间取成熟叶片进行诱导表达分析。结果从蜘蛛香中克隆得到了长度为1779bp的GES基因(VjGES)完整开放阅读框(ORF)的cDNA序列,编码592个氨基酸,与同一科属的缬草相似性最高达99%。VjGES编码的蛋白相对分子质量是67.23 kDa,理论等电点为5.15,此蛋白不存在跨膜区域。qRT-PCR检测结果表明,VjGES基因在根茎中表达量最高,其次是在成熟叶中表达量较高,在新生叶中表达量最低;VjGES对MeJA的诱导比较敏感,MeJA诱导后处理48h后基因的表达水平达到最高。结论成功从蜘蛛香植株中克隆到可能参与环烯醚萜生物合成途径中的关键酶GES基因。
赵爽董婷婷唐红
关键词：蜘蛛香基因克隆生物信息学分析基因表达
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