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天津市应用基础与前沿技术研究计划(06YFJMJC10400)
作品数:
2
被引量:4
H指数:1
相关作者:
徐忠伟
陈小义
呼文亮
王凤梅
徐瑞成
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相关机构:
天津市第三中心医院
武警医学院
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发文基金:
天津市应用基础与前沿技术研究计划
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作者
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徐瑞成
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王凤梅
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呼文亮
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陈小义
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徐忠伟
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高默杰
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中华医学杂志
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年份
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2010
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Na+/K+-ATP酶α1亚单位小干扰RNA和哇巴因诱导肝癌HepG2细胞S期阻滞及其机制
被引量:3
2010年
目的观察哇巴因联合Na+/K+-ATP酶(钠泵)011亚单位小干扰RNA(siRNA)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织和肝癌细胞系SMC7721、Bel7402和HepG2细胞钠泵α1亚单位的表达。CCK-8法检测采用钠泵0L1亚单位siRNA和哇巴因作用肝癌HepG2细胞增殖抑制状况,分析各组细胞的钠泵活性变化,流式细胞术分析细胞周期变化。实时定量PCR和蛋白质印迹法检测钠泵仅1、促分裂源活化蛋白激酶1(MAPK1)、细胞围期蛋白1(CyclinA)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白抑制因子(P21WAFI)表达的变化。结果肝癌组织标本的钠泵α1亚单位密度值(174.7±16.8)明显高于正常肝组织(65.3±7.9,P〈0.05);HepG2细胞钠泵α1亚单位表达明显高SMMC-7721和Bel-7402细胞(P〈0.05)。siRNA、哇巴因和联合用药可抑制HepG2细胞的增殖,联合实验组效果更显著(P〈0.05),0.03μmol/LsiRNA组、0.1μmol/L哇巴因和联合实验组细胞24、48和72h抑制率分别为17.4%、20.3%、24.3%,37.5%、44.3%、51.2%,52.3%、70.2%、88.2%。各实验组均出现钠泵活性降低,以联合实验组最显著(P〈0.05)。0.1μmol/哇巴因和联合实验组HepG2细胞S期比例从24.2%上升至66.5%和75.2%;实时定量PCR和蛋白质印迹检测显示哇巴因组和联合实验组P21“”+表达上调而钠泵d1亚单位、MAPKl、CyclinA、CDK2和PCNA表达下调。结论钠泵仅1亚单位siRNA联合哇巴因抑制HepG2细胞钠泵后可抑制细胞增殖,而P21WAF1表达上调和CyclinA/CDK2/PCNA周期调控复合体生成减少可能是引起s期阻滞的主要原因。
徐忠伟
王凤梅
徐瑞成
呼文亮
陈小义
关键词:
肝细胞
哇巴因
RNA干扰
哇巴因和华蟾毒配基通过调节ERK信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究
被引量:1
2010年
目的:通过检测钠钾泵(Na+/K+-ATPase)抑制剂哇巴因和华蟾毒配基对肿瘤细胞存活的影响,研究其通过调节ERK信号通路诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,检测Na+/K+-ATPase的活性变化,Hochest33342荧光染色检测细胞形态学变化;单细胞电泳检测细胞DNA损伤程度,钙离子荧光探针检测Ca2+浓度变化;Westernblot检测Caspase-3、ERK的表达变化。结果:哇巴因和华蟾毒配基可抑制Na+/K+-ATPase的活性;可使HepG2细胞呈典型的凋亡形态特征;单细胞电泳显示其可损伤HepG2细胞DNA双链;Fluo-3AM检测显示哇巴因和华蟾毒配基促进了Ca2+浓度增高;Western blot显示其可促进Caspase-3的活化,上调ERK磷酸化水平。结论:Na+/K+-ATPase抑制剂可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,导致细胞DNA损伤,诱导细胞内游离Ca2+浓度增高,促进细胞凋亡途径中主要蛋白Caspase-3的活化。而ERK信号通路在哇巴因和华蟾毒配基诱导的HepG2细胞凋亡过程中发挥着关键调控作用。
高默杰
徐忠伟
王凤梅
陈小义
呼文亮
徐瑞成
关键词:
哇巴因
HEPG2细胞
细胞凋亡
游离钙离子
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