广东省卫生厅资助课题(B2004038)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：周灿权高军马芸张仁礼更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学广东省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省卫生厅资助课题更多>>
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- 靶向SMPD1基因的RNA干扰对人成纤维细胞凋亡的保护作用被引量：3
- 2007年
- 【目的】以人包皮成纤维细胞(HFF)为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA(siRNA)对酸性鞘磷脂酶1(SMPD1)基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组(lipofectamine 2000),瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡,MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用。【结果】小干扰RNA1,2,3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%,39%,63.2%,以siRNA1最高,最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间为48h。SMPD1蛋白在48h出现沉默效果,96h开始恢复。50nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡,细胞存活率为73.8%,与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义。【结论】三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果,其中siRNA1效果最佳,沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡。
- 高军周灿权张仁礼马芸
- 关键词：SIRNA成纤维细胞凋亡
