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国家科技重大专项(2012ZXl0001-004)

作品数：1 被引量：0H指数：0
相关作者：陈德喜袁霖石英徐树莹李庆更多>>
相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇点突变
  • 1篇抑制剂
  • 1篇整合酶
  • 1篇整合酶抑制剂
  • 1篇制剂
  • 1篇人类免疫
  • 1篇人类免疫缺陷
  • 1篇人类免疫缺陷...
  • 1篇人类免疫缺陷...
  • 1篇突变
  • 1篇突变株
  • 1篇缺陷病
  • 1篇酶抑制剂
  • 1篇免疫缺陷
  • 1篇免疫缺陷病
  • 1篇免疫缺陷病毒
  • 1篇HIV-1
  • 1篇HIV整合酶...
  • 1篇病毒

机构

  • 1篇首都医科大学...

作者

  • 1篇丁渭
  • 1篇乔录新
  • 1篇徐萌
  • 1篇李庆
  • 1篇徐树莹
  • 1篇石英
  • 1篇袁霖
  • 1篇陈德喜

传媒

  • 1篇中华传染病杂...

年份

  • 1篇2014
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
人类免疫缺陷病毒-1整合酶区标准突变株真核表达载体的构建及其应用
2014年
目的构建整合酶区标准突变株真核表达载体，并进行初步功能验证，为HIV-1表型耐药研究提供技术方法。方法采用点突变的方法，以质粒pNL4-3．Luc．R-E为模板，扩增整合酶区片段（含突变位点Y143、Q148），经过BamHI和XhoI双酶切，通过T4DNA连接酶将纯化的PCR产物与经过BglⅡ和XhoI双酶切的pcDNA6．2-LTRgagpolSl连接，命名为pcDNA6．2-LTRgagpol，经过GatewayTM技术的BP／LR反应，将LTRgagpol片段重组到pNL4-3-attR，构成整合酶区标准突变质粒。在聚乙烯亚胺（PEI）转染试剂介导下，与水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白质粒共转染HEK293细胞，得到HIV-1假病毒，应用整合酶抑制剂拉替拉韦与野生株假病毒进行表型耐药比较，将制备的病毒效价按4：1的比例感染HEK293细胞，同时加入拉替拉韦，终浓度为1μmol／L，感染48h后测荧光素酶报告基因。样本间抑制率比较采用单因素方差分析。结果带有整合酶区主要突变位点的HIV-l标准耐药株（pNL4-3-Q148R、pNL4-3-Y143H）构建成功。应用1μmol／L拉替拉韦进行表型耐药检测时，野生型病毒对拉替拉韦最为敏感，报告基因数值平均为1．72×10^3，Y143H耐药株（1．18×10。）和Q148R耐药株（2．82×10。）对拉替拉韦表现为耐药，对三者相对荧光素酶单位取对数值做统计学分析，野生株与Y143H耐药株相比差异有统计学意义（F=38．800，P=0．025），野生株与Q148R耐药株相比差异有统计学意义（F=174．355，P=0．006）。Y143H耐药株与Q148R耐药株相比，Q148R耐药株对拉替拉韦敏感性更低，差异具有统计学意义（F=22．551，P=0．042）。结论成功构建了带有整合酶区主要突变位点的HIV一1标准耐药株载体，并成功表达，为研究临床HIV-1标本表型耐药典定了基础。
徐树莹乔录新徐萌袁霖李庆丁渭石英陈德喜
关键词：HIV-1HIV整合酶抑制剂点突变病毒
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