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一种党参高质量总RNA的提取方法被引量：2: 2012年; 目的建立提取高质量党参叶片总RNA的有效方法。方法以山西陵川(药材生产管理规范)GAP基地栽培党参为材料,分别用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法提取党参总RNA,通过紫外光谱分析和甲醛变性凝胶电泳对提取的总RNA进行鉴定。结果 3种方法提取的RNA差异有统计学意义;Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法所提总RNA完整性较差,且有小分子盐类杂质,不能满足进一步的分子生物学研究;采用CTAB法提取的总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值约为2.0,A260/A230>2.0,电泳28S、18S条带清晰,比值为1.5～2.0,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,可以满足下游分子生物学实验要求。结论改良CTAB法提取的总RNA完整性好、纯度高,是一种提取高质量党参叶片总RNA的有效方法。; 王静芳曹秋芬高建平; 关键词：中草药总RNA提取

基于SSR标记的党参属部分药用植物的遗传多样性和遗传结构评价被引量：14: 2018年; 目的:采用简单重复序列(SSR)标记技术对来自中国6个省市的党参属4种药用植物进行分析,为党参核心种质资源构建和分子标记辅助育种积累资料。方法:利用10对SSR分子标记引物对党参的遗传多样性和分化程度进行分析,并对党参属的3种药用植物(党参、素花党参、川党参)居群进行聚类分析和遗传结构评价。结果:党参10对SSR引物各位点平均等位基因数(Na)和多态性位点百分率(PPL)分别为4. 1和100%;观察杂合度(Ho),期望杂合度(He),平均杂合度(Ha),Shannon’s信息指数(I)的平均值分别为0. 431 9,0. 486 2,0. 410 3,0. 853 7。党参居群水平上的Na,I,He和Ho分别为1. 9~3. 2,0. 44~0. 90,0. 28~0. 57和0. 27~0. 61;其中甘肃陇西德兴家种居群遗传多样性最丰富。遗传相似度的聚类分析将供试党参、素花党参、川党参和秦岭党参共38个居群划分为3类,秦岭党参居群单独为一类(类群Ⅰ),川党参居群和素花党参居群为第二类(类群Ⅱ),党参居群为第三类(类群Ⅲ)。党参、素花党参、川党参的遗传结构分析分为2个基因池,过渡类型少。结论:党参具有丰富的遗传多样性,这一特性与其迁地引种的历史以及自身生物学特性相关;党参居群间存在较高程度的遗传分化,这可能源于自然地理隔离以及近期人类活动引起的生态环境片段化。本文为党参遗传多样性、遗传结构和资源保护等方面的研究提供了理论依据。; 曹玲亚谷聪孙海峰吉姣姣高建平; 关键词：简单重复序列杂合度

党参CpUGPase基因的克隆、序列分析与原核表达被引量：5: 2016年; 目的为研究党参多糖代谢途径,从党参Codonopsis pilosula根中克隆多糖代谢关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶CpUGPase基因,并进行序列分析和原核表达。方法根据党参转录组中CpUGPase基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增得CpUGPase开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体PET-28a-CpUGPase,转入大肠杆菌BL21(DE3)后,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 CpUGPase ORF序列全长1 413bp,编码470个氨基酸。序列分析表明,CpUGPase基因具有保守的UGPase_euk催化位点,属于A型糖基转移酶蛋白家族。构建PET-28a-CpUGPase重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约54 900,与预测的蛋白相对分子质量一致。结论从党参根中克隆得到CpUGPase基因,并建立了稳定的原核表达体系,为进一步纯化CpUGPase蛋白,研究其结构和功能奠定了基础。; 李晶郭琼琼孙海峰高建平; 关键词：党参基因克隆原核表达

党参CpGAPDH基因的克隆及表达分析被引量：6: 2018年; 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因为糖代谢过程中关键酶基因及常用内参基因。该研究以党参Codonopsispilosula转录组数据库为基础，以马铃薯GAPDH基因为参照，同源克隆得到党参甜肋日基因，命名为印GAPDH，基因开放阅读框（ORF）全长1014bp，编码337个氨基酸。生物信息学分析表明，CpGAPDH与其他物种GAPDH具有高度相似性，与马铃薯、丹参GAPDH亲缘关系较近，无信号肽，预测其定位于细胞质，且具多个磷酸化位点，结合保守结构域预测分析，该蛋白属于四聚体NAD结合酶超家族。原核表达分析发现重组工程菌可诱导表达出接近44．3kDa的蛋白质，与理论相对分子质量基本相符。qRT-PCR分析显示印GAPDH基因在不同组织及不同发育时期根系中相对表达量差异不显著，稳定性分析显示该基因表达较稳定，由此克隆得到了1个新的党参候选内参基因，为党参多糖合成相关基因的表达分析奠定了基础。; 王晓林吉姣姣高建平; 关键词：党参基因克隆生物信息学

潞党参HPLC特征图谱研究被引量：28: 2015年; 该实验采用RP-HPLC色谱法,Dikma-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水,流速0.8 mL·min-1,波长220 nm,梯度洗脱,对54批次党参样品进行了HPLC特征图谱分析研究,比较了潞党参与其他不同基源、不同产地党参特征图谱中特征峰数目与相对峰面积的异同,同时进行相似度评价。建立了潞党参HPLC特征图谱,确定了7个特征峰相对保留时间,指认了特征图谱中codonopyrrolidium B、紫丁香苷、党参苷I、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ5个特征峰,为科学评价和有效控制山西道地药材潞党参质量提供了一种方法,为潞党参质量标准制订提供了依据。; 关琳静连云岚李建宽针娴史宪海高建平; 关键词：潞党参 HPLC特征图谱

党参转录组中SSR位点信息分析被引量：76: 2014年; 目的采用生物信息学方法分析党参转录组文库EST序列简单重复序列(SSR)位点,快速、大规模鉴定党参功能性SSR。方法使用MicroSAtellite(MISA)软件分析党参高通量转录组SSR的分布频率和重复基元的类型特征,利用软件Primer3设计引物,并通过SSRFinder校验SSR,筛选SSR引物。结果从45 511条Unigenes中共搜到7 327个SSR位点,分布在6 017条Unigenes序列中,发生频率为12.22%,共有415种重复基元,平均每4 520 bp含1个SSR位点,二核苷酸重复占主要地位,发生频率为58.67%,在所有重复基元中,AG/CT出现频率最高。共获得4 329条SSR引物。结论大规模的SSR分子标记开发将有助于党参遗传多样性与分子育种研究。; 王东曹玲亚高建平; 关键词：党参转录组 SSR 引物

潞党参多糖含量测定被引量：25: 2014年; 目的：对潞党参及其他产地党参多糖含量测定，为制订潞党参药材质量标准提供依据。方法：以无水葡萄糖为对照品，采用苯酚一硫酸法显色，利用紫外分光光度法测定潞党参及其他产地党参多糖含量。结果：葡萄糖在5．4—54．0μg／mL范围内与吸光度呈良好的线性关系（以r=0．999）；平均回收率为97．56％。潞党参多糖含量的平均值为18．39％。结论：测定方法操作简单，重复性好，结果准确可靠。可用于潞党参多糖含量测定。; 针娴高建平曹玲亚; 关键词：党参潞党参多糖苯酚-硫酸法

党参根组织RNA提取的研究与优化: 2014年; 目的：建立党参根组织高质量总RNA的提取方法。方法：针对党参根组织多糖含量高的特点，比较了CTAB—LiCl，CTAB—PVP，改良Trizol法3种总RNA的提取方法。结果：CTAB—LiCl法无法提取得到总RNA，CTAB—PVP法提取的总RNA有多糖等杂质污染，改良Trizol法提取的总RNA无DNA及其它杂质污染，党参根组织的产量为120．8μg·g-1，A260／A280在1．8-2．0间，A260／A230大于2．0。结论：改良Trizol法操作简单，提取时间短，提取的RNA可以用于后续分子生物学研究。; 曹玲亚王东曹秋芬高建平; 关键词：党参总RNA提取

Validation of Reliable Reference Genes for Accurate Normalization in RT-qPCR Analysis of Codonopsis pilosula被引量：1: 2017年; Objective To identify reliable reference genes（RGs） for normalization of real-time PCR（RT-q PCR） data in Codonopsis pilosula. Methods The expression profiles of 10 candidate RGs（GAPDH, ACT, α-TUB, β-TUB, UBQ, CYP, EF-1α, NAC, F-box and PP2A） were examined in C. pilosula during the phenological period. The raw materials examined included roots, stems, leaves, and flower buds at flowering and boll-forming stages, five growth stages of untreated and treated roots with plant growth retardant. The best-suited RGs were accessed using ge Norm, NormF inder, Best Keeper, and Ref Finder algorithms. Results The best-ranked references genes differed across the samples. GAPDH and PP2A were the most suitable for expression analysis in untreated tissues while GAPDH, α-TUB, and PP2A were ranked as the three most stably expressed genes in untreated roots, while NAC and CYP were the most stably expressed genes in stressed（i.e., treated） roots. The expression of UGPase, a key enzyme for CPP biosynthesis, was determined to further validate the selected RGs. Conclusion A total of 10 RGs can be used as reference genes of C. pilosula, however the appropriate one should be used as it may chance.; Ling-ya CaoXiao-xiao LiDong WangHai-feng SunJian-ping Gao; 关键词：NORMALIZATION

道地药材“潞党参”与常用商品党参鉴别研究被引量：11: 2015年; 目的:为鉴别潞党参药材和制订潞党参地方标准提供依据。方法:采用性状鉴别和显微鉴别方法对潞党参及不同基源和不同产地常用商品党参药材进行鉴定。结果:潞党参、素花党参和川党参性状差异明显,栽培品潞党参根头下环纹少,素花党参环纹致密且长达全长一半以上,而川党参表面有明显纵沟,木部比例小约为1/3;与潞党参同来源的台党"狮子盘头"明显,根头下致密环纹可达全长一半,而"白条党"表面黄白色,近根头处有绳孔。粉末特征主要为石细胞、网纹导管、黄色有节乳汁管、菊糖和淀粉粒,各类党参粉末特征略有差别。潞党参横切面外侧木栓细胞嵌有石细胞;韧皮部宽广;乳管群与筛管群相伴径向排列,且常与周围环绕的薄壁细胞形成团状在韧皮部外层分布;形成层成环;木质部导管呈放射状排列;薄壁细胞中含菊糖。结论:可以通过性状鉴定区别山西道地药材潞党参及常用商品党参,建议制订潞党参地方质量标准增加粉末鉴别。; 赵江燕王东高建平; 关键词：党参潞党参性状鉴别显微鉴别商品药材

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