国家自然科学基金(30770908)
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学佛山科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LMP1基因重组慢病毒载体的构建及体外表达被引量：4
- 2009年
- 目的构建EB病毒潜伏膜蛋白I(LMP1)基因重组慢病毒载体,并检测其在体外的表达。方法采用DNA重组技术,将LMP1基因克隆到带绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体质粒pCDF中,筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR扩增和DNA测序鉴定重组载体。以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装质粒pFIV-34N、包膜质粒pVSV-G和带目的基因的质粒pCDF-LMP1共同转染到包装细胞293FT细胞内包装病毒,荧光显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组病毒的滴度。将重组慢病毒转染小鼠B淋巴瘤细胞系A20,RT-PCR和Western blotting检测LMP1的表达。结果重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实LMP1基因准确克隆入pCDF的多克隆位点,LMP1序列与GenBank中的数据完全一致。荧光显微镜下观察可见293FT细胞的细胞浆与细胞膜有大量的绿色荧光,重组慢病毒浓缩后滴度为107Tu/ml,慢病毒转染A20细胞的效率>90%。RT-PCR和Western blotting检测A20细胞内有LMP1的表达。结论成功构建了LMP1基因重组慢病毒表达载体,慢病毒可高效转染A20细胞,为后期研究EBV致瘤基因LMP1在淋巴瘤发病机制中的作用奠定基础。
- 陈小艳张弓刘芳李慧灵方唯意江庆萍赵彤
- 关键词：潜伏膜蛋白1基因重组慢病毒载体
- 悬浮培养细胞的细胞块制作及其应用被引量：9
- 2009年
- 淋巴造血系统来源的细胞株在细胞培养过程中因细胞无法贴壁生长，只能采取悬浮培养的方式。悬浮培养的细胞在进行形态学及免疫表型研究中，通常采用细胞滴片和细胞甩片技术，因获得的细胞为三维立体结构，故所观察到的细胞结构欠清晰。细胞块技术是近几年逐步发展起来的针对人体细针穿刺标本及脱落细胞学诊断的一项技术，基本原理是将液体中的样本进行离心，
- 王志强黄学平黎相照李锋陈小艳张弓吴自勍赵彤
- 关键词：细胞块细胞株免疫细胞化学
- 播散性鼠B细胞淋巴瘤动物模型的建立被引量：8
- 2008年
- 目的在具有免疫能力的BALB／c小鼠上构建播散性B淋巴瘤动物模型。方法经尾静脉注射鼠源性B细胞淋巴瘤细胞株A20于同源BALB／c小鼠，0～3个月间观察动物成瘤情况；取动物脏器行石蜡包埋、病理切片、HE染色；流式细胞仪检测其CD19的表达。结果尾静脉注射2×10^6、2×10^7细胞于14只BALB／c小鼠，成瘤时间分别为76．8±12．0天和26.1±7．9天；总体成瘤率分别为71.4％（5／7）和100％（7／7）；在肝脏、脾脏、淋巴结、肠、肠系膜、下肢、颈部、子宫和臀部等多脏器成瘤；流式检测瘤组织细胞mCD19表达强阳性。结论运用尾静脉注射方法构建了内脏器官广泛发生的播散性B淋巴瘤BALB／c小鼠动物模型，为进一步进行B淋巴瘤相关研究提供了实验依据。
- 刘芳张弓陈小艳李慧灵张彦王怡心黄作平褚红娟王辛赵彤
- 关键词：BALB/C小鼠动物模型
- 类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤小鼠模型的免疫学特征被引量：1
- 2010年
- 本研究建立类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤的BALB/c小鼠模型并探索其免疫学特征。将鼠源性B淋巴瘤细胞株(A20细胞)接种于同源BALB/c小鼠以建立B细胞淋巴瘤鼠模型。实验分为3组:成瘤小鼠组,未成瘤小鼠组和正常小鼠组(对照组)。用流式细胞术检测肿瘤细胞CD抗原表达及成瘤小鼠、未成瘤小鼠和对照正常小鼠的外周血和脾脏的T/B淋巴细胞亚群比例。结果表明:在成功构建病理学形态类似人弥漫大B细胞淋巴瘤的BALB/c鼠模型肿瘤组织中,检测到CD3、CD4、CD8、CD19、CD30阳性细胞的比例分别为(49.27±23.75)%,(6.07±3.65)%,(51.2±23.1)%,(67.06±16.39)%,(37.93±17.03)%,与接种前A20细胞相比,其CD3和CD8阳性细胞比例显著升高,CD19阳性表达比例显著下降(p<0.05)。成瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群阳性表达比例较正常小鼠有显著差异,其CD3和CD4阳性细胞比例显著降低(p<0.05)。未成瘤小鼠脾脏淋巴细胞亚群的阳性表达比例与正常小鼠相比,CD3、CD4、CD8阳性细胞比例降低,而CD19阳性细胞比例升高(p<0.05)。结论:本研究为在有免疫功能的小鼠体内进行B细胞淋巴瘤相关研究提供了免疫相关实验依据。
- 刘芳张弓周新华刘靖岳赟赵彤
- 关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤BALB/C鼠免疫表型
- 三株DLBCL细胞的鉴定和分子亚类与临床病理相关分析
- 目的鉴定OCI-Ly1、OCI-Ly8、OCI-Ly10三株DLBCL细胞,进行分子亚类分型及临床病理相关分析。方法采用细胞块切片观察细胞形态,运用CD3、CD20、CD10、Bcl-6、MUM1抗体进行免疫标记确定其分...
- 王志强吴自勍黎相照杨建芳黄学平李锋周新华赵彤
- 关键词：细胞系细胞周期免疫表型
- 文献传递
- 不同方式转染小鼠B淋巴瘤细胞A20的探讨被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨小鼠B淋巴瘤细胞A20最佳的转染方式,为后期研究LMP1基因在A20细胞中的表达及作用奠定基础。方法:分别使用脂质体转染法、NucleofectorTM核酸转染法和慢病毒载体介导转染法将带有报告基因绿色荧光蛋白的重组质粒pCDF-LMP1转染小鼠B淋巴瘤细胞A20,荧光显微镜观察细胞内绿色荧光的分布,比较分析这三种转染方式对A20细胞的转染效率。结果:脂质体转染效率最低,仅见个别细胞有绿色荧光,NucleofectorTM核酸转染效率约为10%,浓缩后的慢病毒载体介导转染法效率最高,可达80%以上。结论:对于悬浮细胞A20而言,浓缩后的慢病毒载体介导的转染法是最佳的转染方式,该方法在将外源基因转染至悬浮细胞方面值得推广,也为极难转染的细胞做稳定转染提供参考价值。
- 陈小艳张弓刘芳赵彤
- 关键词：脂质体转染慢病毒转染
- mic2/CD99基因克隆及在霍奇金淋巴瘤L428细胞株中表达被引量：4
- 2009年
- 目的克隆mic2/CD99基因并表达于L428细胞株。方法通过PCR及双酶切方法,从Jurkat细胞基因组RNA中获得mic2/CD99全长基因编码序列,克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体上,构建包含mic2/CD99全长基因载体;用脂质体转染法将mic2/CD99全长基因载体转染至L428细胞系;并从分子水平验证其存在。结果RT-PCR方法扩增出大小为558bp片段,序列测定其编码序列正确,酶切鉴定亚克隆序列正确。结论成功构建了mic2/CD99全长基因载体,并稳定转染于L428细胞株中。
- 黄作平何滢周新华韩西群吴自勍张艳温宗华赵彤
- X线放射后BALB/c小鼠mCD99L2-A20细胞成瘤率及外周血T淋巴细胞亚群变化
- 2016年
- 目的探讨X线放射对BALB/c小鼠外周血T淋巴细胞亚群及m CD99L2-A20细胞成瘤率的影响。方法40只BALB/c小鼠随机分为放射组和对照组,每组20只。放射组小鼠接受X线放射处理,对照组小鼠不接受X线放射处理。2组小鼠每只皮下注射接种m CD99L2-A20细胞悬液100μL(1×107个细胞),观察2组小鼠的成瘤情况;分别选择对照组、放射组接种m CD99L2-A20后成瘤及未成瘤小鼠各5只,于接种后20 d抽取小鼠外周静脉血,应用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平。结果放射组小鼠成瘤13只(放射后成瘤组),未成瘤7只(放射后未成瘤组),成瘤率为65.0%;对照组小鼠成瘤1只,未成瘤19只,成瘤率为5.0%;放射组小鼠成瘤率显著高于对照组(χ2=15.824,P=0.000)。对照组、放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD3^+、CD4^+水平比较差异均无统计学意义(F=2.857、2.755,P=0.116、0.104),但3组小鼠外周血CD8^+水平比较差异有统计学意义(F=65.087,P=0.000)。放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD8+水平显著低于对照组(t=6.166、12.982,P=0.000),放射后成瘤组小鼠外周血CD8^+水平显著低于放射后未成瘤组(t=4.597,P=0.002)。结论 X线放射后BALB/c小鼠接种m CD99L2-A20细胞成瘤率提高,其机制可能与机体免疫功能抑制及细胞毒性T细胞减少有关。
- 宋先璐黄作平张弓周同冲韩西群
- 关键词：BALB/C小鼠T淋巴细胞亚群成瘤率
- 地高辛标记斑马鱼cd99l2基因RNA探针的制备被引量：2
- 2010年
- 目的制备用于斑马鱼胚胎早期cd99l2基因时空表达检测的地高辛标记RNA探针。方法设计引物,构建cd99l2/pGM-T重组质粒,用SacII和SalI分别进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6RNA聚合酶和T7RNA聚合酶转录合成地反义和正义地高辛标记的RNA探针,用整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的表达。结果成功构建了cd99l2/pGM-T重组质粒,体外转录获得反义和正义RNA探针,反义探针杂交检测证实cd99l2基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中中枢神经系统呈现高表达,正义探针未检测到表达信号。结论本研究制备的反义cd99l2RNA探针,兼顾了特异性和敏感性,能有效检测斑马鱼胚胎早期cd99l2基因的定位表达,而正义探针可以作为阴性对照,为进一步探究cd99l2基因在斑马鱼发育过程中的作用机制奠定了基础。
- 温宗华张艳吴自勍周新华韩西群张文清赵彤
- 关键词：斑马鱼原位杂交探针
