深圳市科技计划项目(200901017)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：庄志雄龚春梅刘建军郑波张兵更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心中山大学深圳大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 纳米二氧化硅对HaCaT细胞谷胱甘肽还原酶表达及活力的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨经不同粒径纳米二氧化硅处理后,HaCaT细胞内谷胱甘肽还原酶(GR)的表达及其活力的变化。方法将对数生长期HaCaT细胞经15μg/ml的15、30、100nm纳米二氧化硅处理24h后,采用实时荧光定量PCR(RT-Q-PCR)检测GR基因mRNA的表达水平,采用Westernblotting检测GR蛋白的表达水平,采用试剂盒检测GR活力变化。结果不同粒径纳米二氧化硅对GR基因的mRNA水平具有明显影响,纳米二氧化硅粒径越小,mRNA表达水平越低,但均低于对照组;GR蛋白表达量随纳米二氧化硅粒径增大而增大,且15、30nm纳米二氧化硅抑制GR表达,100nm纳米二氧化硅促进GR表达;GR活力随纳米二氧化硅粒径的增大而升高。结论纳米二氧化硅可能通过影响GR的表达及酶活力的变化促进氧化应激反应。
- 张兵杨细飞王晓梅刘建军何浩伟龚春梅蒋英芝郑波庄志雄
- 关键词：纳米二氧化硅谷胱甘肽还原酶氧化应激
- hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立hPARP-1过表达的HaCaT细胞株,观察过表达该基因后所引起的生物学效应。方法常规提取人皮肤角质细胞HaCaT的总RNA,RT-PCR扩增PARP-1全长cDNA基因片段,构建含PARP-1全长cDNA基因片段的真核表达载体pEGFP-PARP-1,通过BglⅡ、xhoⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pEGFP-N2和pEGFP-PARP-1分别转染人皮肤角质细胞HaCaT,通过G418加压筛选,建立稳定高表达hPARP-1的HaCaT-PARP-1细胞株,并采用Realtime Q-PCR和Western blotting检测其mRNA和蛋白的表达水平。结果 RT-PCR扩增产物经BglⅡ、xhoⅠ双酶切后,与pEGFP-N2连接构建的重组体经酶切和测序,结果与GeneBank报道序列一致。Realtime Q-PCR及Western blotting结果显示,转染pEGFP-PARP-1质粒的细胞其PARP-1在mRNA及蛋白的表达水平均显著高于对照组。结论 PARP-1高表达细胞株成功建立。
- 龚春梅庄志雄陶功华杨淋清吴德生刘建军
- 关键词：基因修复基因转染
