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国家自然科学基金(30770915)

作品数：12 被引量：25H指数：4
相关作者：曾令宇徐开林陈翀曹江潘秀英更多>>
相关机构：徐州医学院附属医院徐州医学院南京医科大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生
  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 8篇细胞
  • 6篇移植物抗宿主
  • 6篇移植物抗宿主...
  • 6篇植物抗宿主病
  • 6篇抗宿主病
  • 6篇基因
  • 6篇骨髓
  • 5篇慢病毒
  • 4篇调节性
  • 4篇异基因
  • 4篇异基因骨髓
  • 4篇慢病毒载体
  • 4篇节性
  • 4篇病毒载体
  • 3篇调节性T细胞
  • 3篇小鼠
  • 3篇骨髓移植
  • 3篇白血
  • 3篇白血病
  • 3篇TREG细胞

机构

  • 11篇徐州医学院附...
  • 1篇南京医科大学
  • 1篇徐州医学院

作者

  • 10篇曾令宇
  • 10篇陈翀
  • 10篇徐开林
  • 9篇曹江
  • 8篇潘秀英
  • 7篇李振宇
  • 4篇李莉
  • 3篇程海
  • 2篇李艳杰
  • 2篇王东洋
  • 1篇吴庆运
  • 1篇王春玲
  • 1篇赵恺
  • 1篇贾路
  • 1篇桑威
  • 1篇杜冰
  • 1篇陈伟
  • 1篇张焕新
  • 1篇藏宇

传媒

  • 3篇中华血液学杂...
  • 2篇中华器官移植...
  • 2篇中国实验血液...
  • 2篇四川大学学报...
  • 1篇白血病．淋巴...
  • 1篇中华微生物学...

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2011
  • 6篇2010
  • 2篇2009
  • 1篇2008
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
红色荧光蛋白标记的小鼠白血病模型的建立
2010年
目的 利用红色荧光蛋白（DsRed）标记的小鼠淋巴瘤EL4细胞株,建立荧光标记的小鼠白血病模型,并对模型进行分析和鉴定.方法 将EL4/DsRed细胞以低剂量（5×10^2/只）、中剂量（5×10^3/只）、高剂量（2.5×10^4/只）经尾静脉注入经清髓照射的C57BL/6小鼠体内,同时接种骨髓细胞5×10^6/只,采用流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、组织病理等方法鉴定小鼠成模情况.结果 C57BL/6小鼠接种不同剂量EL4/DsRed细胞后白血病发病率达100%,移植后第2周FCM示受鼠肝、脾、骨髓和外周血中有大量EL4/DsRed细胞;各组组织器官病理检查呈现出不同程度的肿瘤细胞浸润.结论 用DsRed标记的EL4细胞以5×10^2/只植入C57BL/6小鼠,即可成功建立荧光标记的小鼠白血病模型,可为白血病发病机制、微小残留病检测等研究提供有价值的动物模型.
陈翀李艳杰曹江王东洋曾令宇潘秀英徐开林
关键词：荧光抗体技术
小鼠adam10基因启动子克隆和双荧光素酶报告基因系统构建及鉴定被引量：1
2012年
本研究旨在克隆小鼠adam10基因启动子,构建以adam10基因启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究adam10基因转录调控提供有效工具。以BALB/c小鼠脑组织为模板,采用PCR方法克隆小鼠adam10基因启动子序列至pCR-Blunt载体,酶切后连接至荧光素酶报告质粒pGL4.10启动子区域,构建重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,采用阳离子脂质体法与阳性对照质粒pGL4.74共转染真核细胞293FT,以离子霉素刺激为刺激组、DMSO为未加干预组,同时以不含启动子的pGL4.10与阳性对照质粒pGL4.74共转染组为阴性对照组,化学发光仪检测荧光强度及比例。结果表明,酶切及测序验证克隆的adam10启动子序列正确且无突变,构建的重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10与阳性对照质粒pGL4.74载体成功共转染293FT细胞,pGL4.10-adam10转染细胞后具有转录活性。离子霉素刺激组活性明显高于DMSO组,荧光比值约为DMSO组2倍(P<0.05),阴性对照组不具备转录活性。结论:成功克隆了adam10启动子并构建了重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,离子霉素可增强adam10基因启动子转录活性。
陈伟陈翀张焕新曹江桑威吴庆运赵恺藏宇曾令宇徐开林
关键词：聚合酶链反应报告质粒
基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响被引量：2
2010年
目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）及移植物抗白血病（GVL）效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子（Foxp3）基因转导入Balb/c小鼠的CD4＋CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.（1）单纯照射组：经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;（2）白血病对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株（EL4细胞）500个;（3）移植对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个;（4）工程Treg组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋基因工程Treg细胞5×106个;（5）空载体对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋空载体转导的CD4＋CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活（超过60 d）受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（10.3±1.5）d、（20.7±1.9）d、（26.0±4.3）d、（49.0±17.7）d和（24.4±4.1）d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）.白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,
曹江李莉陈翀曾令宇李振宇程海徐开林
关键词：移植物抗宿主病移植物抗白血病
携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体的构建及表达被引量：5
2009年
目的构建携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体,并研究其在CD4+CD25-T细胞中的表达。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体。采用脂染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转导效率,通过RT-PCR及Western Blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测Foxp3的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP/pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/mL。以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞基因转导效率达55.95%,并且存在Foxp3 mRNA和蛋白水平的高表达。结论成功构建了携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体;该系统可有效的介导Foxp3基因在CD4+CD25-T细胞中表达。
曹江陈翀徐开林潘秀英李振宇曾令宇
关键词：慢病毒FOXP3调节性T细胞
基因工程化Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的作用被引量：6
2011年
目的探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法利用慢病毒载体介导，将鼠Foxp3基因转导人BALB／c小鼠的CD4^=CD25-T淋巴细胞，即为基因工程Treg细胞。建立小鼠异基因骨髓移植模型，在移植时联合输注基因工程Treg，通过受鼠移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理学改变、供者T淋巴细胞激活、炎性细胞因子浓度等指标评价其防治GVHD的作用。结果单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（8．8±0．6）、（36．7±2．5）、（51．6±4．0）和（34．1±2．3）d，工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组（P〈0．05）。移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变，工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常，未见GVHD病理表现，该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组。移植后3d（＋3d）、＋4d工程Treg组受鼠脾脏中供者T淋巴细胞数明显低于移植对照组和空载体对照组（P〈0．05），且＋4d工程Treg组受鼠脾脏供者T淋巴细胞中IFN-γ^＋细胞比例较后两组明显降低（P〈0．05）。在＋21～＋28d移植对照组、工程Treg组、空载体对照组受鼠血清IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度达高峰，工程Treg组在＋21d时IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度高峰较其他两组为低（P〈0．05）。结论小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可通过减少受鼠移植后供者T淋巴细胞的早期扩增、激活以及炎性细胞因子的分泌有效减少GVHD的发生，减轻其严重程度。
曹江李莉陈翀曾令宇李振宇潘秀英徐开林
关键词：骨髓移植移植物抗宿主病慢病毒感染
供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响被引量：8
2010年
本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p<0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。
曹江陈翀曾令宇李振宇程海潘秀英徐开林
关键词：移植物抗宿主病移植物抗白血病效应
慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究
2010年
目的 通过慢病毒载体介导的鼠叉状头螺旋转录因子（Foxp3）基因表达构建鼠基因工程调节性T细胞（Tr）,探讨输注基因工程Tr细胞对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠Foxp3基因转导入BALB/c小鼠的CD4＋CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Tr细胞.建立小鼠异基因骨髓移植模型,在移植时联合输注基因工程Tr,通过受鼠移植后生存期、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等指标评价其防治GVHD的作用.并与单纯照射组、移植对照组、空载体对照组相比较.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Tr组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（8.8±0.6）d、（36.7±2.5）d、（51.6±4.0）d和（34.1±2.3）d,工程Tr组小鼠存活时间明显长于其他各组（P＜0.05）.移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Tr组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现.移植后移植对照组、工程Tr组、空载体对照组受鼠血清IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度在21～28 d时达高峰,工程Tr组在21 d时IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度高峰较其他两组为低（P＜0.05）.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Tr细胞可通过减少受鼠移植后炎性细胞因子的分泌有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.
曹江李莉陈翀曾令宇李振宇潘秀英徐开林
关键词：骨髓移植调节性移植物抗宿主病慢病毒
延迟连续骨髓移植对主要H-2不合小鼠移植后急性移植物抗宿主病的影响
2008年
目的研究延迟连续骨髓移植对主要H-2不合小鼠移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响。方法以近交系C57BL／6（H-2^b）小鼠为供鼠、BALB／c（H-2^d）小鼠为受鼠，受鼠接受总剂量为8．0Gy ^60Coγ射线全身照射（TBI）后，实验分为5组：①空白对照组（只输注0．4ml RPMI1640）；②经典移植组（TBI后4h输注）；③连续移植组（TBI后4h，1、2、3d连续输注）；④延迟移植组（TBI后4d输注）；⑤延迟连续移植组（TBI后4、5、6、7d连续输注）。移植后用流式细胞术检测各组受鼠H-2^b细胞植入水平，ELISA法测定IL-2、IL4、IL-6、IL-10、IFN-叮的血浆浓度，比较各组的生存率、aGVHD发生情况及造血重建情况。结果经典移植组出现典型aGVHD表现，均于3周内死亡，连续移植组、延迟移植组60d生存率分别为30％、50％，延迟连续移植组出现aGVHD的小鼠数量少、程度轻，60d存活率70％，高于其他组（P〈0．05）。延迟移植组和延迟连续移植组血浆IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌高峰较经典移植组延迟5～10d，IL4、IL-10的表达高于经典移植组（P〈0．05），IL-2、IFN-γ的表达低于经典移植组（P〈0．05）。各组血浆IL-6浓度均于TBI后5～10d达高峰，且经典移植组的表达高于其他组（P〈0．05）。延迟连续移植组60d时H-2^b细胞的百分率为（98．1±1．1）％，20d时外周血白细胞计数恢复正常。结论延迟连续骨髓移植可减轻小鼠异基因移植后的aGVHD，提高生存率，不影响骨髓植入和造血重建，是合适的移植方式，其减轻aGVHD机制可能与减少T细胞Ⅰ类细胞因子分泌，促进Ⅱ类细胞因子分泌有关。
王春玲徐开林潘秀英杜冰
关键词：骨髓移植移植物抗宿主病小鼠
鼠VEGF红色荧光慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
2010年
目的构建含鼠血管内皮细胞生长因子(mVEGF)红色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法构建含mVEGF和红色荧光蛋白(DsRed)基因双顺反子重组慢病毒质粒;采用脂染法将慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察DsRed表达,收集48 h和72 h病毒上清并感染靶细胞239T,荧光显微镜下观察DsRed表达情况,并行Western blot分析培养上清和胞浆内mVEGF表达。结果成功构建慢病毒表达质粒pTK208-mVEGF-IRES-DsRed,重组慢病毒滴度达5×106PFU/mL,并获得蛋白DsRed和mVEGF的表达。结论含mVEGF红色荧光慢病毒质粒成功介导mVEGF蛋白的表达,该载体有望为研究VEGF的病理生理学机制及基因靶向治疗提供有效的工具。
王东洋贾路陈翀李艳杰曾令宇
关键词：慢病毒载体血管内皮细胞生长因子红色荧光蛋白293T细胞
自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞的制备和特性研究被引量：4
2009年
目的制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞（Treg细胞），检测其表型变化，并观察其增殖能力及免疫抑制能力。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列（IRES）和绿色荧光蛋白基因（GFP）的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞，经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4^＋CD25-T细胞，流式细胞术（FCM）检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达，CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES—GFP、pXZ208·Foxp3-IRES—GFP，包装的重组慢病毒滴度达10^6IU／ml。以pXZ208-IRES—GFP为阴性对照组，共培养法感染CD4^＋CD25-γ细胞，实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高。在抗CD3e单抗、抗原呈递细胞存在条件下，实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组（P〈0．01）；且该细胞可显著抑制CI）4^＋CD25-T细胞的增殖。结论成功构建了自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程Treg细胞；基因工程Treg细胞具有与CD4^＋ CD25^＋ Treg细胞相似的表型及低增殖性和免疫抑制性。
曹江陈翀曾令宇李振宇程海潘秀英徐开林
关键词：慢病毒转录因子FOXP3T淋巴细胞调节性
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