国家自然科学基金(30770914)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：周剑峰洪振亚肖敏韩志强孙立石更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 257例初治急性髓系白血病患者细胞和分子遗传学特征分析
- 2009年
- 目前，急性白血病的诊断技术涵盖了细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学的内容，传统的细胞遗传学技术虽然是全基因组筛查的常规手段，但却耗时费力，且只能在60％-80％的骨髓标本中获得足够的染色体中期分裂相，使其应用受到了限制；一些分子遗传学方法，如多重RT—PCR和间期荧光原位杂交（FISH）能弥补其不足。
- 黄亮张恒熊婕李春蕊孟力黄梅邓金牛李登举肖毅汤屹孟凡凯张义成张东华孙汉英刘文励周剑峰
- 关键词：白血病患者急性髓系细胞遗传学技术间期荧光原位杂交初治
- RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路封闭对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路的封闭对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响。方法:RT-PCR及蛋白质印迹法检测RhoC及ROCK-Ⅰ在不同卵巢癌细胞系中mR-NA及蛋白的表达水平;将ROCK-Ⅰ反义寡核苷酸(ASODN)转染人卵巢癌细胞系SW626与Caov-3细胞后,检测转染前后ROCK-Ⅰ蛋白的表达,Boyden小室观察各株细胞转染前后侵袭及运动能力的变化,MTT比色法测定转染前后黏附能力的变化。结果:RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关,r=0.95,P<0.01,转染ROCK-ⅠASODN后,细胞内ROCK-Ⅰ的表达明显减少;细胞的侵袭能力受到明显的抑制,10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的(75.6±3.8)%和(54.7±2.9)%,Caov-3为(68.8±4.7)%和(50.0±4.5)%;转染两种浓度ASODN的SW626与Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的(80.0±1.3)%、(63.7±1.9)%、(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%;定向运动能力分别为对照组的(83.9±1.4)%、(64.1±1.3)%、(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%。结论:RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,阻断ROCK-Ⅰ的表达可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭能力。
- 洪振亚韩志强肖敏孙立石周晓曦卢运萍周剑峰
- 关键词：RHOC反义寡核苷酸
- 人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定
- 2011年
- 目的探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料。方法构建人CD123 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-pEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和Western印迹法检测人CD123蛋白的表达情况,初步筛选出人CD123高表达的CHO-S细胞株;并进一步用经人CD123 Fc重组融合蛋白免疫的小鼠血清检测该细胞株hCD123表达情况。结果测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD123基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确;流式分选结合G418筛选得到1个人CD123高表达的细胞株——克隆8G9 CHO-S,其CD123-APC阳性细胞百分数为92.07%,用融合蛋白免疫的血清检测各细胞株人CD123表达情况,结果显示克隆8G9 CHO-S细胞和对照CHO-S细胞的CD123阳性率分别为(97.94±1.93)%和(2.84±1.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论建立了人CD123抗原稳定高表达的细胞株克隆8G9 CHO-S,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产及其导向治疗奠定了坚实的基础。
- 杨漾黄亮王娜周剑峰
- 关键词：细胞筛选
- RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的过度激活对卵巢癌细胞恶性行为的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨RhoC/ROCK-Ⅰ的过度激活对卵巢癌细胞生物学特性的影响。方法RT-PCR及Western blot检测RhoC及ROCK-Ⅰ在卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA及蛋白的表达水平;将携带ROCK-Ⅰ组成性激活突变体p160ROCK-ⅠΔ3的质粒(pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3)以脂质体介导,转染上述4株人卵巢癌细胞,划痕试验和Boyden小室检测转染前后4种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力的变化,MTT比色法测定p160ROCK-ⅠΔ3对细胞增殖能力的影响。结果RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关(r=0.95,P<0.01),转染pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3后,4株细胞的侵袭能力与对照组比较分别提高31.1%、33.0%、24.5%和39.4%;迁移能力分别提高33.9%、33.0%、25.0%和40.2%。各株细胞的增殖能力未显示出明显的变化。结论RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的活性与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关,ROCK-Ⅰ活性的提高可显著增强卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭和迁移能力。
- 洪振亚韩志强肖敏孙立石周晓曦卢运萍周剑峰
- 关键词：RHOC卵巢肿瘤肿瘤转移
- 硼替佐米联用组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导血液肿瘤细胞凋亡的效率
- 2008年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂曲古菌素A（trichostatin A，TSA）、Apicidin与Bortezomib单药及联合应用对恶性血液病肿瘤细胞凋亡的影响。方法应用200～2000nmol／L TSA、Apicidin，5～80μmol／L Bortezomib分别处理恶性血液病肿瘤细胞株K562、SHI-1、Jurkat 24h，用流式细胞仪检测细胞凋亡。根据流式细胞术结果选取TSA 800nmol／L，Apicidin 400nmol／L分别与5～80μmol／L Bortezomib联合作用于K562细胞，TSA 1000nmol／L，Apicidin 400nmol／L分别与Bortezomib联合作用于SHI-1细胞，TSA 600nmol／L，Apicidin 600nmol／l，分别与Bortezomib联合作用于Jurkat细胞。以上药物作用24h后应用流式细胞仪检测细胞凋亡并绘制浓度-凋亡曲线。分别以Apicidin 200nmol／L，Bortezomib 20μmol／L及Apicidin 200nmol／L与Bortezomib 5μmol／L联用作用于K562细胞24h，用Western blot检测Bcl-XL蛋白的表达差异。结果TSA、Apicidin、Bortezomib均可促进K562、Jurkat、SHI-1细胞凋亡。TSA、Apicidin分别与Bortezomib联用，可导致K562、SHI-1细胞系凋亡率的明显提高，而对Jurkat细胞系没有明显影响。Bcl-XL蛋白在Apicidin与Bortezomib联用24h组较对照组及单一药物处理组表达水平明显下调。结论小剂量Bortezomib联合TSA或Apicidin应用于K562、SHI-1细胞系，可以明显提高细胞凋亡率，此时，TSA、Apicidin用量较用单药时显著减少。
- 孙立石洪振亚韩志强肖敏曹阳黄亮周剑峰
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素AAPICIDIN硼替佐米细胞凋亡
