安徽省高校省级自然科学研究项目(Kj2010B118)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：李玉云李见王露魏晓巍张强更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院巢湖职业技术学院合肥职业技术学院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省蚌埠市科技计划项目蚌埠市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨髓间充质干细胞与再生障碍性贫血的研究进展被引量：5
- 2012年
- 再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）是一种由造血干细胞缺陷、造血微环境损伤及免疫异常引起的骨髓造血功能衰竭以及外周全血细胞减少的综合征[1]。AA的发病机制尚未完全明确,其发病机制可能和造血干细胞的内在缺陷、造血微环境的异常以及机体免疫功能紊乱有关,
- 管英华谢杨虎魏晓巍李见王露李玉云
- 关键词：间充质干细胞再生障碍性贫血造血微环境
- IDO基因重组慢病毒载体构建及其转染hUCMSCs细胞的实验研究
- 2013年
- 目的构建共同表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体,探讨其在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)中的表达,为下一步利用高表达IDO的hUCMSCs移植治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法将IDO基因克隆至慢病毒pGC-FU-EGFP表达载体中,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。重组慢病毒表达载体质粒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;制备携带IDO基因的慢病毒Lentivirus-IDO,并测定重组慢病毒的滴度。用重组慢病毒以最佳MOI值感染hUCM-SCs作为实验组,以空载体转染的hUCMSCs(空载体组)及未转染的hUCMSCs(未转染组)作为对照,应用RT-PCR及Western blot法分别检测细胞中IDO mRNA及IDO蛋白水平的表达情况。结果经PCR及基因测序鉴定pGC-FU-EGFP-IDO重组慢病毒表达载体构建成功,包装慢病毒Lentivirus-IDO滴度为2×108 TU/mL。通过EGFP表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为30,此时对细胞的转染效率可达到80%以上。RT-PCR检测显示实验组IDO mRNA表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性;Western blot检测示实验组细胞内IDO蛋白表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性。结论成功构建了人IDO基因的重组慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-IDO能有效感染hUCMSCs,IDO蛋白可在hUCMSCs中长期、稳定表达。
- 李玉云李见王露翟玮玮吴正中张强
- 关键词：再生障碍性贫血人脐带间充质干细胞绿色荧光蛋白慢病毒载体
- 人脐带间充质干细胞对再生障碍性贫血小鼠造血的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:通过从脐带中分离和培养脐带间充质干细胞(MSCs),探讨其对再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血的影响。方法:原代贴壁法培养人脐带MSCs,将小鼠分为模型组、对照组、MSCs输注组进行实验。经静脉输注免疫介导方法建立再障模型小鼠,分别于3、7、14、21、28 d观察其外周血象指标变化和骨髓组织形态;ELISA检测造血负调控因子(IFN-γ)的水平,计数骨髓造血干细胞集落生成单位。结果:原代培养中脐带组织块直接贴壁后8～10 d,边缘爬出长梭形MSCs,随传代培养呈平行、漩涡状生长;再障小鼠经MSCs输注治疗后外周血象明显增高,IFN-γ水平下降(P<0.01);治疗组骨髓红细胞集落形成单位与粒-巨噬细胞集落形成单位均较模型组明显增高(P<0.01),成纤维细胞集落形成单位计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人脐带来源的MSCs对再障模型小鼠骨髓可发挥造血支持作用。
- 管英华魏晓巍谢扬虎李见王露李玉云张强
- 关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞脐带
- 人脐带间充质干细胞在再生障碍性贫血模型小鼠中的应用
- 2012年
- 目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSC)移植对药物联合射线诱导的再生障碍性贫血(AA)模型小鼠造血功能的影响。方法选取6～7周龄的雌性昆明小鼠120只,用60Coγ射线照射后皮下注射环磷酰胺与氯霉素,分别建立对照组、AA模型组及MSC AA模型组。造模后第2天给予MSC组小鼠输注人UC-MSC 1×106/kg,观察各组小鼠生存率、外周血象变化、骨髓有核细胞数量、骨髓病理学特征以及造血细胞集落的变化等。结果模型组小鼠于第10天开始死亡,生存率比MSC组低(P<0.05)。其WBC、PLT和Ret明显减少,RBC变化不明显;16 d时两组除RBC继续降低外,其余均轻度回升,而MSC组回升比模型组明显,差异有统计学意义(P<0.05)。造模过程中,小鼠骨髓有核细胞数量明显减少,晚期脂肪组织增生。输注UC-MSC后,MSC组骨髓有核细胞数、粒-单核巨核细胞集落(CFU-GM)数量均明显高于模型组,而成纤维细胞集落(CFU-F)数量没有明显变化。结论人UC-MSC移植可减轻AA模型小鼠骨髓造血衰竭程度,提高存活率。
- 李玉云谢扬虎
- 关键词：环磷酰胺氯霉素
- 脐血间充质干细胞表达的IDO对异基因淋巴细胞的增殖及再生障碍性贫血小鼠造血恢复的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs)发挥免疫调节作用机制及对再生障碍性贫血小鼠的治疗效应。方法采集足月胎儿脐带血,采用羟乙基淀粉沉降+淋巴细胞分离两步法分离培养UCB-MSCs。观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物,成骨、成脂诱导鉴定分化潜能。研究UCB-MSCs表达吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)的情况。建立UCB-MSCs与异基因淋巴细胞共培养体系,探讨其发挥免疫调节作用的机制;同时构建免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型,观察其对再障造血恢复的影响。结果 UCB-MSCs为成纤维样细胞,贴壁生长。流式细胞仪检测结果表明,其不表达造血标志CD34,高表达CD44、CD73,体外成功诱导成骨与成脂分化。经γ干扰素(IFN-γ)诱导表达IDO活性,对异基因淋巴细胞的增殖可能发挥免疫抑制作用。MSCs输注再生障碍性贫血小鼠模型,可减轻小鼠骨髓造血衰竭程度。结论 UCB-MSCs在体外成功分离培养,并具有间充质干细胞生物学特性;MSCs可能通过IDO途径发挥免疫负调控作用。UCB-MSCs的IDO表达对于免疫介导再障小鼠模型的骨髓造血恢复具有改善作用。
- 李玉云魏晓巍李见王露张英杰张强
- 关键词：间充质干细胞异基因免疫介导
