国家自然科学基金(81300447)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 丙氨酸溶液作为A→O血型转变酶解缓冲液的研究
- 2014年
- 本研究旨在探讨丙氨酸缓冲液对α-N-乙酰半乳糖胺酶发挥高效酶解A抗原活性的影响。用Western blot检测α-N-乙酰半乳糖胺酶在丙氨酸等不同缓冲液中与红细胞的结合能力。结果表明,丙氨酸溶液也可以作为A→O血型转变的酶解缓冲液,α-N-乙酰半乳糖胺酶在丙氨酸溶液中酶解A型红细胞所用剂量与在甘氨酸溶液中的相当;Western blot证实,在丙氨酸溶液中α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞结合能力与在甘氨酸中相似,这也进一步证明α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞的结合是α-N-乙酰半乳糖胺酶发挥酶解A抗原的活性所必需的。结论:丙氨酸溶液可以作为A→O血型转变的酶解缓冲液,在这一缓冲液中α-N-乙酰半乳糖胺酶与红细胞紧密结合,可以发挥高效的酶解A抗原的活性。
- 李素波张雪张印则檀英霞鲍国强王颖丽季守平宫锋高红伟
- 关键词：血型转变丙氨酸
- 制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗,再经HiT rap rP rotein A柱纯化获得高纯度的抗体;间接ELISA法测定单抗效价,Western印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗,Western印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合;间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml,红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后,其残留酶量<10 ng/ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法,可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。
- 李素波贠志敏高红伟张雪檀英霞张士坤季守平宫锋
- 关键词：Α-半乳糖苷酶单克隆抗体血型转变
- 荷斯坦奶牛红细胞作为异种血源的研究
- 2014年
- α-Gal抗原是引起异种移植超急性排斥反应的主要异种抗原。本研究探讨新型基因重组α-半乳糖苷酶对荷斯坦奶牛红细胞上的异种抗原的作用。用酶解法清除红细胞表面的α-Gal抗原,用盐水法或抗人球蛋白法进行奶牛红细胞与人血浆的凝集试验,用流式细胞术检测奶牛红细胞表面的α-Gal抗原(FITC-IB4)标记和FITC-IgG标记红细胞的荧光强度。结果表明,盐水法和抗人球蛋白法检测显示,酶解后荷斯坦奶牛红细胞与人混合血清不发生凝集。流式细胞术检测显示,酶解后荷斯坦奶牛红细胞较酶解前其FITC-IB4标记率降低了99.0%,FITC-IgG标记率降低了87.8%。结论:新型α-半乳糖苷酶可以用来清除荷斯坦奶牛红细胞上的α-Gal抗原,且荷斯坦奶牛红细胞的异种抗原主要是α-Gal抗原。酶解法制备的荷斯坦奶牛红细胞可能成为人血替代品。
- 陈利萍李素波张雪宫锋高红伟徐华
- 关键词：荷斯坦奶牛异种抗原Α-半乳糖苷酶
