河南省高校杰出科研人才创新工程基金(2006KYCX008)
- 作品数：16 被引量：53H指数：5
- 相关作者：曹健王育军王红军董理吴兴泉更多>>
- 相关机构：河南工业大学中原工学院更多>>
- 发文基金：河南省高校杰出科研人才创新工程基金河南省杰出青年科学基金河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学更多>>
- DNA改组技术在酶工程中的应用被引量：1
- 2008年
- DNA改组技术是一种应用最广泛且简单有效的分子定向进化方法。它是一种高通量的随机突变筛选技术,可以对目的基因进行多次重组和选择,得到性质优良的突变文库。介绍了DNA改组技术的原理及其在酶工程中的应用。
- 刘莹曹健王中太杨永刚黄亮
- 关键词：DNA改组酶工程
- 嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究被引量：15
- 2007年
- 亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考。通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-802.00ml,反应温度37℃,反应时间3h。
- 曹健王月囡王红军王育军于海东
- 关键词：嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶
- 产酶培养条件对一株嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的影响被引量：1
- 2007年
- 本实验用MRS培养基嗜酸乳杆菌,并通过添加亚油酸(LA)诱导其产亚油酸异构酶。单因素试验结果表明,在MRS培养基中添加糖类物质总体上不利于产酶,添加尿素、牛肉膏、酵母膏、酪蛋白等有机氮源后,酶活力比对照组有较大幅度提高,而添加无机氮源酶活力增加幅度不如有机氮源。在培养基中添加一定量的NaCl和卵磷脂也有助于酶活力的提高。由正交试验结果确定的最佳产酶条件为:培养温度37℃,培养时间24h,每100ml培养基中添加10mgLA,接种量3%(V/V)。
- 王月囡曹健张琳王红军王育军于海东
- 关键词：嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶
- 罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶的生物信息学分析被引量：1
- 2011年
- 综合利用多种生物信息学工具对罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶基因及其启动子区进行了定位,分析了4种乳酸菌亚油酸异构酶基因的上游调控区,发现了主要保守位点.分析证明罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶具有2个二硫键,1个糖基化位点,多个磷酸化位点,无信号肽序列,但在25（26）-42位存在跨膜区.证明罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶的密码子偏好性与大肠杆菌和酿酒酵母的密码子偏好性存在差异,初步分析了该基因在这些宿主菌中表达时可能存在的问题,并提出了改造方案.
- 陈士华吴兴泉曹健
- 关键词：罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶生物信息学
- 乳酸菌天然质粒提取方法的优化被引量：8
- 2010年
- 将前人报道的乳酸菌质粒提取方法与大肠杆菌质粒提取方法相结合,对常用试剂盒质粒提取方法进行改进,建立了一种快速、安全、高效的乳酸菌质粒提取方法。提取过程中,溶菌酶最佳浓度为20mg/ml,最佳处理时间为30min,同时避免了毒性物质溴化乙锭的使用。多次实验结果表明,采用改进后的方法可明显提高乳酸菌天然质粒的提取效果。且重复性好,为下一步乳酸菌的分子改良奠定了基础。
- 万谦曹健吴兴泉李艳芳李凤娟宋鹏
- 关键词：乳酸菌
- 微生物亚油酸异构酶的生物信息学分析被引量：4
- 2007年
- 运用生物信息学方法,对已在GenBank上公开发表的罗伊氏乳杆菌、疮疱丙酸杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和短双岐杆菌等的亚油酸异构酶基因序列进行了分析,并对这些基因序列编码的蛋白质进行了预测.
- 张琳曹健陈金鹏
- 关键词：生物信息学亚油酸异构酶
- 植物乳杆菌共轭亚油酸异构酶基因的克隆、序列分析及重组表达被引量：9
- 2007年
- 利用MRS培养基培养植物乳杆菌AS1.555,收集菌体后提取总DNA,用PCR技术扩增其亚油酸异构酶基因,克隆到pQE30质粒载体上,并进行测序。测序结果表明,扩增DNA全长1710 bp,编码569个氨基酸,分子量为64.7 ku。经同源性比较,此核酸序列与罗伊氏乳杆菌、短双歧杆菌、疮疱丙酸杆菌亚油酸异构酶基因核苷酸序列差别较大,推测此基因的来源与上述菌种不同。
- 相丽新曹健王红军尹艳丽王育军于海东张琳董理
- 关键词：植物乳杆菌克隆
- Nisin抗性菌株的筛选及其抗性基因的克隆
- 2011年
- 利用乳酸链球菌肽(Nisin)抗性基因常与乳糖利用基因位于同一质粒上这一特性,在含300IU/mL Nisin和质量浓度为0.004g/100mL溴甲酚紫的选择性培养基上,从新鲜牛奶中初筛到5株Nisin抗性菌株。经脱脂乳培养基培养、革兰氏染色和镜检,初步确定为乳球菌。分别以5株抗性菌株的基因组和质粒DNA为模板,采用PCR对其Nisin抗性基因(NSR)保守序列进行了扩增,从其中3株抗性菌株(分别命名为N1、N2、N3)的质粒DNA上得到大小约400bp的目的基因产物。经16S rDNA鉴定,进一步确定3株抗性菌株均为乳酸乳球菌。分别以N1、N2、N3的质粒为模板,采用PCR扩增其全长NSR基因,均得到大小约1000bp的目的产物。将从N1得到的NSR基因全长产物与pMD-19T进行连接测序,结果显示,其与已发表序列的相似性达99%,可确定其为NSR基因,且位于抗性菌株N1的质粒上。
- 李艳芳曹健吴兴泉万谦张洁琼田广兰
- 关键词：克隆
- 共轭亚油酸异构酶基因克隆与表达研究进展被引量：1
- 2008年
- 从微生物共轭亚油酸异构酶基因的克隆,重组共轭亚油酸异构酶基因在原核和真核细胞中的表达等方面对共轭亚油酸异构酶基因克隆与表达研究的最新进展进行了综述。
- 杨永刚曹健张中洲刘莹王中太罗宇
- 关键词：共轭亚油酸共轭亚油酸异构酶克隆
- 微生物共轭亚油酸异构酶的生物学研究被引量：8
- 2007年
- 在各种共轭亚油酸异构体中,c9,t11-18∶2和t10,c12-18∶2这两种天然不饱和脂肪酸异构体被认为具有生物活性,如抗癌、抗动脉粥样硬化、减肥、促进生长、缓和免疫反应副作用等,因而在医药、食品、保健品、化妆品等领域有着广阔的应用前景.一些微生物能产生共轭亚油酸异构酶(Conjugated linoleic acid isomerase,EC 5.2.1.5),该酶又能专一性地催化亚油酸转化为活性共轭亚油酸异构体的反应,因此近几年来倍受关注,利用生物合成法生产共轭亚油酸已成为该领域未来的发展趋势.然而目前,共轭亚油酸异构酶的物种分布及进化关系、在细胞中的生物学功能、结构域、催化反应机理等尚未得到完整的阐释,利用基因工程技术大量高效地表达有活性的重组酶也尚未得到很好的解决.本文在前人对共轭亚油酸异构酶进行的多方面研究的基础上,对近年来共轭亚油酸异构酶的分布、生物学作用、酶的催化反应机理、酶基因的克隆表达等生物学方面的研究进展进行了综述,并利用生物信息学方法对已知的共轭亚油酸异构酶序列进行了初步分析.
- 王红军曹健王育军董理相丽新张琳
- 关键词：共轭亚油酸异构酶生物学功能基因克隆与表达
