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国家自然科学基金(30770936): 作品数：26 被引量：77H指数：5; 相关作者：罗雅玲赖文岩钟浩海谭家余蓝海兵更多>>; 相关机构：南方医科大学南方医院南方医科大学南方医科大学附属中山市博爱医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中华医学会临床医学慢性呼吸道疾病科研专项资金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

肿瘤抑制基因PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响被引量：2: 2015年; 目的观察肿瘤抑制基因PTEN对人气道平滑肌细胞(HASMCs)迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养的HASMCs(Ad-PTEN组),并与携带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒空载体(Ad-GFP组)和空白对照(MOCK)组对比,采用MTS测定细胞增殖、Transwell法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK蛋白的表达。结果 Ad-PTEN组的吸光度(A)值和每单位面积迁移的细胞数显著低于Ad-GFP及MOCK组(均P<0.05),Ad-GFP和MOCK两对照组间差异无统计学意义(P>0.05),提示过表达PTEN基因能抑制HASMCs的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而Ad-GFP、MOCK组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与AdGFP及MOCK组比较,Ad-PTEN组p-Akt表达水平和FAK蛋白的磷酸化水平显著下调(均P<0.05),Ad-GFP及MOCK两对照组间差异无统计学意义(P>0.05),说明过表达PTEN能下调Akt蛋白和FAK蛋白的磷酸化水平。结论过表达PTEN可能通过下调p-Akt及p-FAK的表达,抑制HASMCs的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。; 蓝海兵罗雅玲赖文岩龚园其; 关键词：肿瘤抑制基因 PTEN 气道平滑肌细胞迁移增殖

巨噬细胞移动抑制因子经Rho激酶途径促进人胚肺成纤维细胞表型转化: 目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)表型转换的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:不同浓度的rMIF(25～100μg/L)分别作用于MRC-5细胞24 h或48 h,RT-...; 陈培芬邱智辉张香梅黎振兴罗雅玲赖文岩孙秀才; 关键词：巨噬细胞移动抑制因子成纤维细胞肌成纤维细胞 RHO相关激酶类; 文献传递

改变PTEN基因表达影响支气管平滑肌细胞增殖被引量：1: 2010年; 目的:通过基因过表达和RNA干扰(RNAi)技术改变PTEN基因的表达并观察其对人支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖和相关信号通路的影响。方法:利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN),转染BSMC细胞,建立PTEN基因过表达细胞模型Ad-GFP-PTEN-BSMC和PTEN基因沉默细胞模型Ad-GFP-shPTEN-BSMC,并以感染Ad-GFP和空白组作为对照。通过荧光倒置显微镜检测转染效率;Westernblot法检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况;MTS/PMS法检测细胞生长的变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期的变化。结果:腺病毒介导的过表达载体和shRNA载体都能有效改变PTEN基因的表达。PTEN基因表达上调后,BSMC细胞生长受到抑制,G0-G1期细胞增多,S期细胞和G2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路受到抑制,而MAPK/ERK通路未见变化;PTEN基因表达下调后,BSMC细胞生长受到促进,S期细胞增多,G0-G1期细胞和G2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路激活,但MAPK/ERK通路却受到抑制。结论:PTEN基因可能主要通过调节PI3K/AKT通路影响人支气管平滑肌细胞的生长。; 张达成罗雅玲赖文岩钟浩海陈丽丽; 关键词：腺病毒载体细胞增殖 AKT ERK1/2

地塞米松对哮喘小鼠肺组织IL-21及其受体表达的干预作用被引量：6: 2013年; 目的研究慢性哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21受体(IL-21R)表达的变化,探讨地塞米松(Dex)对小鼠肺组织IL-21与IL-21R表达的影响。方法 SPF级BALB/c雌性小鼠33只,随机分为对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组,每组11只。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠支气管哮喘模型;HE染色观察气道炎症程度;测量支气管壁厚度及平滑肌厚度;免疫组织化学和免疫印迹法分析小鼠支气管肺组织中IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达。结果哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌厚度较对照组增加(P<0.01),地塞米松组支气管壁厚度与平滑肌厚度低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组小鼠肺组织IL-21蛋白与IL-21R蛋白的表达高于对照组(P<0.05),地塞米松组IL-21蛋白与IL-21R蛋白表达低于哮喘组(P<0.05)。结论哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达增强,地塞米松抑制哮喘小鼠肺组织IL-21与IL-21R的表达。; 宫静任敦强罗雅玲赖文岩李俊红王慰盈; 关键词：IL-21 哮喘地塞米松小鼠

PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达被引量：1: 2009年; 目的应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体。方法将PTENcDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细胞的表达。结果感染腺病毒载体的HEK293细胞表达GFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增后病毒达到合适的滴度,构建的Ad-PTEN腺病毒滴度为2×1010pfu/ml,PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳证实其表达,Western blotting检测到腺病毒感染的气道平滑肌细胞内PTEN蛋白表达明显增高。结论成功构建了携带野生型PTEN腺病毒载体,为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了实验基础。; 钟浩海罗雅玲赖文岩徐健陈丽丽叶涵; 关键词：PTEN 腺病毒载体气道平滑肌细胞哮喘

IL-22对人气道细胞的作用被引量：5: 2011年; 目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。; 张旃蓝海兵周丽丽赖文岩徐建黎振兴任敦强叶涵钟浩海罗雅玲; 关键词：白细胞介素-22 气道上皮细胞气道平滑肌细胞

重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染体外培养的人气道平滑肌的实验研究被引量：2: 2011年; 目的:研究重组腺病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因转染体外培养的人气道平滑肌(HASMCs)的方法。方法:用组织贴块原代培养传代至3～8代的HASMCs,重组绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体(Ad-GFP)以不同的感染复数(multiplicity of infection,MOI)转染,荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效率,CCK-8法检测其对细胞的毒性。结果:随着MOI增高,转染效率增高。MOI=100时Ad-GFP对HASMCs的感染效率可达(96±0.32)%,以感染后48h达高峰,持续7d仍有绿色荧光表达;转染后的细胞与未转染细胞相比,细胞毒性无统计学差异(P>0.05)。结论:重组腺病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因Ad-GFP能高效转染HASMCs,转染后对细胞无毒性,是一种安全的基因载体。; 蓝海兵高杨罗雅玲钟浩海张达成任敦强赖文岩; 关键词：转染人气道平滑肌重组腺病毒绿色荧光蛋白

Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响被引量：3: 2010年; 目的观察Rho激酶抑制剂Y-27632对人气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响,为哮喘防治提供新思路。方法组织块贴壁法培养人ASMCs,对数传代后随机分为4组,A组加入含10%FBS的DMEM培养基,B、C、D组分别加入浓度为0.4、2.0、10.0μmol/L的Y-27632+含10%FBS的DMEM培养基,非放射性细胞增殖(MTS)/吩嗪甲酯硫酸盐(PMS)法检测各组细胞增殖情况(490 nm处A值),流式细胞仪分析细胞周期。结果C、D组A值均显著低于A组(P<0.05、0.01);C、D组G0/G1期细胞比例显著高于A组,S、G2/M期细胞比例显著低于A组(P<0.05、0.01)。结论Rho激酶抑制剂Y-27632可抑制人ASMCs增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期;本研究为哮喘防治提供了新的选择。; 林琳罗雅玲赖文岩; 关键词：气道平滑肌细胞增殖细胞周期

PTEN基因重组腺病毒对人气道平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制: 2009年; 目的观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染人气道平滑肌细胞(HASMC)后的表达,研究其对HASMC增殖的影响,并对其作用机制作初步的探讨。方法利用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体,体外转染HASMC,荧光显微镜观察Ad-PTEN的转染效率。RT-PCR及Western blotting检测PTEN在HASMC中的表达。采用MTS/PMS法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期分布。Western blotting检测Akt及p-Akt的表达,RT-PCR检测P21mRNA的表达。结果外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入HASMC,当感染复数MOI为100时,体外转染效率高达98%以上。Ad-PTEN感染HASMC后,能有效地引起细胞内过度表达PTEN。上调PTEN表达能显著提高G0/G1期细胞的比例,抑制细胞的增殖。上调PTEN表达能显著降低p-Akt及提高P21的表达水平。结论成功构建了过度表达PTEN的原代培养HASMC模型,该模型能有效地引起细胞内过度表达PTEN。上调PTEN表达能有效抑制HASMC的增殖,可能是通过对PI3K/AKt信号通路的抑制及上调P21的表达而起作用的。; 陈丽丽罗雅玲赖文岩徐健钟浩海张达成叶涵; 关键词：气道平滑肌细胞 PTEN AKT

巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成被引量：5: 2011年; 目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞6h、12h、24h、48h后,ELISA法测定细胞培养上清中TGF-β1蛋白含量;100μg/L的rMIF作用于MRC-5细胞48h,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白合成;100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞48h,刺激前0.5h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果:与对照组比较,100μg/L的rMIF对细胞培养上清TGF-β1蛋白含量无显著影响(P>0.05);100μg/L的rMIF可显著促进Ⅰ型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)合成。Y27632预刺激后,100μg/L的rMIF促进Ⅰ型胶原mRNA和蛋白合成能力显著减弱(P均<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。; 陈培芬罗雅玲赖文岩邢晓雯谭家余骆子义邱智辉; 关键词：巨噬细胞移动抑制因子人胚肺成纤维细胞胶原 RHO

国家自然科学基金(30770936)

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