河南省高校杰出科研人才创新工程基金(2006KYCX020)
- 作品数：11 被引量：22H指数：4
- 相关作者：胡建和王青杭柏林徐彦召郑素玲更多>>
- 相关机构：河南科技学院中国农业科学院上海兽医研究所郑州大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定
- 2010年
- 研究表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒pAd-H5的遗传稳定性及重组病毒的滴度。将重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,取第5、10、15和20代的重组病毒采用PCR方法扩增禽流感病毒HA基因,并进行基因序列分析;用标记为GFP的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒DNA中均扩增出了约1700bp的目的条带,与HA基因片段长度一致。基因序列分析表明:第5、10、15代重组病毒中的HA基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即HA基因417位A→G),但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变),表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化;计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1mL。重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,具有良好的遗传稳定性,重组腺病毒的病毒滴度相对较高。
- 王青胡建和徐彦召
- 关键词：H5N1亚型禽流感重组腺病毒
- 禽流感病毒新型疫苗的研究进展被引量：5
- 2010年
- 疫苗免疫是禽流感防控的主要措施之一,随着生物技术的不断发展,基因工程亚单位疫苗、活载体疫苗、DNA疫苗等新型疫苗得以研究和开发,这为禽流感的防控提供了新的手段。新型疫苗除具有传统疫苗的保护效果外,在生物安全和普遍防控等方面也具有广泛的优势,是禽流感疫苗发展的新方向。
- 胡建和王青杭柏林
- 关键词：禽流感病毒新型疫苗
- H5N1禽流感病毒NA基因重组腺病毒表达载体的构建
- 2010年
- 构建携带有H5N1亚型AIV NA基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究AIV中NA基因在病毒致病过程中的作用及相关诊断试剂的开发提供依据。采用PCR的方法从构建好的包含有H5N1AIV NA基因的pMD-19T-N1质粒中扩增出NA基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-N1,将pAdeasyd-N1经pacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有NA基因的腺病毒pAd-N1。结果表明,构建含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-N1经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误。线性化后的pAdeasy-N1转染HEK293细胞,成功获得腺病毒pAd-N1载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。
- 王青胡建和徐彦召朱国坡宋涛李任峰
- 关键词：腺病毒载体H5N1亚型NA基因
- 禽流感疫苗的研究现状被引量：6
- 2010年
- 禽流感是严重危害养鸡业发展的重要传染病之一,目前对禽流感的防制仍以接种禽流感全病毒灭活疫苗为主。DNA疫苗作为一种新兴的疫苗,以其独特的优点正逐渐成为禽流感疫苗研究的热点。作者对近年来禽流感疫苗的研究现状进行分析,以期为禽流感疫苗的研究开发策略提供必要的依据。
- 宋涛胡建和杭柏林
- 关键词：禽流感疫苗
- H5N1型禽流感模型侵染病毒的构建与鉴定被引量：1
- 2010年
- 【目的】构建含有H5N1型禽流感病毒HA、NA的侵染模型病毒,并对构建的模型病毒进行侵染活性及特异性检测。【方法】采用PCR方法扩增出H5N1型AIVHA和NA基因,经纯化回收后将其分别克隆至真核表达载体pcDNA4.0中,构建pcDNA-HA、pcDNA-NA。然后采用磷酸钙共转染方法,将pcDNA-HA、pcDNA-NA和含有LUC报告系统的HIV骨架表达载体pNL4-3.Luc.R-E-,共同转染293T细胞,构建HIV/HA-NA模型病毒,对HIV/HA-NA模型病毒进行细胞侵染活性及特异性检测。【结果】HA、NA基因片段真核表达载体pcDNA-HA、pcDNA-NA与HIV骨架载体在293T细胞中成功表达组装,获得了HIV/HA-NA侵染模型病毒;敏感细胞特异性检测及侵染活性分析表明,HIV/HA-NA模型病毒与其野毒具有共同的敏感细胞。报告系统数据显示,模型病毒可以定量检测其对细胞的侵染程度。【结论】成功构建HIV/HA-NA模型侵染病毒,可以模拟H5N1病毒的侵染过程,定量报告病毒的侵染程度,并且该模型病毒不具有增殖能力,安全可靠,可以方便地用于普通实验室AIV抗体检测和特定药物的筛选。
- 万佳胡建和王青杭柏林王三虎刘兴友
- 关键词：禽流感报告基因
- 重组H5N1亚型禽流感病毒NA基因腺病毒的滴度测定及遗传稳定性研究
- 2010年
- 为了研究表达H5N1亚型禽流感病毒NA基因重组腺病毒pAd-N1的遗传稳定性及重组病毒的滴度,将重组腺病毒pAd-N1在293细胞上连续传代20次,取第5、10、15、20代的重组病毒,采用PCR方法扩增禽流感病毒NA基因,并进行基因序列分析;用绿色荧光蛋白做标记计算出20代次时重组病毒的滴度。结果显示:从各代重组病毒DNA中均扩增出了约1 400 bp的目的条带,序列分析结果表明,第5、10、15代重组病毒中的NA基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有2处发生了点突变(516位A→G,1 323位T→C),但其编码的氨基酸未发生变化,即蛋白抗原表位未发生变化;采用快速测定法计算出重组腺病毒的滴度为109.5pfu/mL。
- 胡建和王青徐彦召郑素玲吴玉苹杭柏林
- 关键词：禽流感重组腺病毒病毒滴度
- 禽流感病毒HA及NA基因序列比较分析被引量：4
- 2010年
- 从GenBank数据库下载世界各地分离的禽流感病毒血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因组序列及其对应的氨基酸序列并对其进行多重比对分析,绘制系统进化树.结果发现来自同一国家或地区的AIV毒株HA基因和NA基因亲缘关系较近.相同亚型的不同毒株之间,HA和NA基因相对比较保守序列的同源性在90%以上.从下载的HA和NA基因数量来看.报道较多的是H5亚型和N1亚型序列.此外.在数据处理过程中通过自编程序结合互联网及免费软件,能迅速进行大规模序列比较分析(20个序列以上),提高了生物数据分析处理的速度.禽流感病毒HA及NA基因序列比较及变异规律分析,将为本病的防制提供一定的理论参考.
- 胡建和王青杭柏林王三虎刘兴友
- 关键词：禽流感病毒HA基因NA基因
- 猪瘟病毒E2基因活载体疫苗研究进展被引量：5
- 2010年
- 猪瘟病毒(CSFV)E2囊膜蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原蛋白,也是研究猪瘟基因工程疫苗的首选抗原。常用的猪瘟病毒E2基因活载体主要有腺病毒载体、逆转录病毒载体、痘病毒载体、伪狂犬病病毒载体、杆状病毒载体等,且每种病毒载体各有其优势特点。国际上应用病毒载体已成功研制出猪瘟新型疫苗并应用于临床。论文主要介绍了目前常用的病毒载体,并分别列举了使用这些表达载体进行猪瘟基因工程疫苗研究的进展情况。
- 王青胡建和郑素玲吴玉苹
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定
- 2010年
- 研究表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒pAd-H5的遗传稳定性及重组病毒的滴度测定。将重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,取第5、10、15和20代的重组病毒采用PCR方法扩增禽流感病毒HA基因,并进行基因序列测定分析;用标记为GFP的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒DNA中均扩增出了约1700bp的目的条带,与HA基因片段长度一致,基因序列分析表明:第5、10、15代重组病毒中的HA基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即HA基因417位A→G),但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变),表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化;计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1ml。重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次,具有良好的遗传稳定性,重组腺病毒的病毒滴度相对较高。
- 王青胡建和徐彦召
- 关键词：H5N1亚型禽流感重组腺病毒
- H5N1禽流感病毒HA和NA基因重组腺病毒共表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽构建携带有H5N1亚型AIVHA和NA基因的重组腺病毒表达载体,进而为AIV基因工程疫苗的开发以及相关诊断试剂的开发提供依据。采用融合PCR的方法扩增出含有H5N1 AIV HA-2A-NA的基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA,将pAdeasyd-H5经PacI线性化后转染HEK293细胞株包装出含有HA-2A-NA基因的腺病毒pAd-HA-2A-NA。结果表明,构建的含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-HA-2A-NA和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-HA-2A-NA经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误。线性化后的pAdeasy-HA-2A-NA转染HEK293细胞包装成功获得腺病毒pAd-HA-2A-NA载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。本试验构建的含有AIV H5N1亚型HA-2A-NA基因的重组腺病毒表达载体,将为进一步研究开发基因工程疫苗提供病毒模型。
- 王青胡建和郑素玲
- 关键词：H5N1亚型HA和NA基因
