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云南省应用基础研究计划面上项目(2010ZC232)

作品数：7 被引量：17H指数：2
相关作者：马雁冰姚宇峰杨旭孙文佳刘存宝更多>>
相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金云南省应用基础研究计划面上项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 6篇生物学
  • 4篇医药卫生

主题

  • 5篇人乳
  • 5篇乳头
  • 5篇瘤病毒
  • 4篇人乳头瘤
  • 4篇人乳头瘤病毒
  • 4篇乳头瘤
  • 4篇乳头瘤病毒
  • 4篇酵母
  • 4篇毕赤酵母
  • 3篇基因
  • 2篇蛋白
  • 2篇人乳头瘤病毒...
  • 2篇启动子
  • 1篇蛋白表达
  • 1篇多态
  • 1篇多态性
  • 1篇衣壳
  • 1篇衣壳蛋白
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白

机构

  • 7篇中国医学科学...

作者

  • 6篇姚宇峰
  • 6篇马雁冰
  • 5篇杨旭
  • 4篇黄惟巍
  • 4篇刘存宝
  • 4篇孙文佳
  • 3篇金晓媚
  • 2篇龙琼
  • 2篇姚月婷
  • 2篇白红妹
  • 2篇李亚东
  • 1篇俞建昆
  • 1篇曹丹凤
  • 1篇周竞贤
  • 1篇易力
  • 1篇史荔
  • 1篇夏烨
  • 1篇张晓琳

传媒

  • 3篇中国生物制品...
  • 2篇微生物学杂志
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇中华临床医师...

年份

  • 1篇2018
  • 1篇2017
  • 2篇2015
  • 3篇2014
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
云南HPV-16型E6、E7基因的突变分析被引量：5
2014年
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型(HPV-16)是引起宫颈癌的一种主要高危型病毒,其2个致癌基因E6和E7的核酸序列变异可能会影响其对宿主细胞的致癌性,已有研究表明其序列突变呈现地域差异性。因此,研究不同地域HPV-16这2个基因的变化情况是宫颈癌流行病学调研的主要内容,也可为研究E6和E7的致癌性积累数据。研究以NCBI登录号为NC_001526.2的HPV-16型病毒的序列为参照,采用Neighbor-joining方法对云南地区74例HPV-16样本的E6、E7的DNA序列构建进化树,结果显示:只有亚洲和欧洲变异亚型,而没有发现非洲1、非洲2、亚-美洲和北美洲这4种变异亚型。DNA序列分析显示:E6的碱基突变以T178G(D25E,59.46%)和T350G(L83V,8.11%)为主,E7的碱基突变主要以A647G(N29S,59.46%)和T846C(同义突变,60.81%)为主。发现E6的新突变有A95G(同义突变,1.35%)和A135G(K11R,1.35%);E7的新突变有C625T(L22F,1.35%)、C627T(同义突变,12.16%)、G689A(G43E,1.35%)、T748G(S63A,1.35%)。此外还发现有一个共突变现象:T178G(D25E,59.46%)-A647G(N29S,59.46%)-T843C(同义突变,21.62%)-T846C(同义突变,60.81%)。
张晓琳刘峰姚月婷姚月婷周竞贤李亚东姚宇峰周竞贤
关键词：HPV-16
HPV 16 L1天然变异体在毕赤酵母中的可溶性表达及病毒样颗粒装配
2018年
目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体p Pink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株p Pink strain 1。重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性。经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况。通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列。结果两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确。两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而M16呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力。Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、Δ424S、D441Δ、K452Q)。结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得。提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造。
杨旭黄惟巍黄惟巍刘存宝姚宇峰白红妹刘存宝
关键词：人乳头瘤病毒毕赤酵母病毒样颗粒
利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白被引量：2
2014年
目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。
金晓媚姚宇峰黄惟巍杨旭孙文佳刘存宝龙琼马雁冰
关键词：启动子毕赤酵母绿色荧光蛋白人乳头瘤病毒16L1蛋白
宿主p53基因第4外显子72位密码子多态性(Pro/Arg)与HPV16感染的相关性研究被引量：1
2014年
目的：研究宿主p53基因密码子72多态性（Pro/Arg）在HPV16感染者和正常健康人群中的分布情况。方法采用 TaqMan SNP Genotyping Assays 方法进行 p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性分析。结果 p53基因密码子72（Pro/Arg）突变的基因型和等位基因频率在HPV16感染组和对照组中差异无统计学意义（P＝0.30和P＝0.88）。不同遗传模型分析显示，p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性在HPV16感染组和对照组中差异无统计学意义（P 0.12～0.88）。结论本研究未发现宿主p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性与HPV16感染相关，结合其他报道数据，推测该突变可能在宫颈正常细胞向癌症细胞转化中起到重要作用。
姚月婷刘峰李铮曹丹凤杨旭马雁冰史荔姚宇峰
关键词：人乳头状瘤病毒16型
用于异源基因表达的毕赤酵母启动子研究进展被引量：7
2015年
甲醇营养型毕赤酵母是一个广泛使用的蛋白表达宿主系统,易于高密度发酵、具有真核细胞翻译后加工修饰特点,适于异源蛋白分泌表迭。转录调控是控制蛋白高效表达的关键环节,启动子是其中重要的元件。毕赤酵母表达系统中应用最为广泛的是甲醇诱导型A0X1启动子和组成型的GAP启动子,已成功用于一些异源蛋白的表达。近年来,发现了其他一些可供利用的启动子,包括来自管家基因的启动子如TEF、PGK1,以及具有特殊调控机制的启动子如FLD、PH089等。此外,通过对启动子进行序列改造,构建启动子文库,实现了对启动子的精细调控。不同的启动子具有各自独特的调控机制与特点,就毕赤酵母启动子在异源蛋白表达应用中的相关研究进展进行综述。
金晓媚马雁冰
关键词：毕赤酵母启动子蛋白表达
人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达
2015年
目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同序列特征等构建HPV L1非融合及融合表达重组质粒及HPV L1谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合表达质粒,转化不同宿主菌(大肠埃希菌DH5α、BL21),在不同的温度下(37、20℃)进行IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及其可溶性,Western blot鉴定表达的融合蛋白。结果 HPV 16 L1蛋白在GST融合蛋白形式下获得了高效表达,而非融合表达或硫氧还蛋白融合表达未见明显目的条带;不同的宿主菌未对GST融合蛋白表达水平产生明显影响;在37℃培养条件下,表达的GST融合蛋白以包涵体形式存在,而在20℃培养条件下,部分表达的蛋白以可溶性形式存在;HPV 16 L1基因不同序列获得了类似的表达水平;经酵母密码子优化的HPV 18 L1与HPV 58 L1基因均能以GST融合表达形式获得与HPV 16 L1相似的高效表达。结论在大肠埃希菌中以GST融合形式可获得多基因型别HPV L1蛋白的高效可溶性表达,为病毒样颗粒体外折叠制备奠定了基础,也为其他外源基因在大肠埃希菌中的高效表达提供了参考。
杨旭夏烨李亚东金晓媚龙琼孙文佳黄惟巍刘存宝姚宇峰马雁冰
关键词：乳头瘤病毒衣壳蛋白大肠埃希菌
人乳头瘤病毒16型L1基因在毕赤酵母中表达的影响因素分析被引量：2
2017年
目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒p PinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和p PinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达。结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85%;M16为-451.50 kcal/mol和47.83%;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10%;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01%。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒p PinkTM-HC与p PinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论:密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性,显著影响了表达水平。研究证明基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。
杨旭黄惟巍黄惟巍刘存宝姚宇峰白红妹刘存宝
关键词：毕赤酵母
全选 清除 导出
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