国家自然科学基金(30770979)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 相关作者：王小众林纳陈治新李丹陈红英更多>>
- 相关机构：福建医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金福建省卫生厅青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 婴儿肝炎综合征甲状腺素与Child-Pugh分级的关系
- 2012年
- 目的:肝脏是甲状腺激素降解、排泄及转化的场所,参与甲状腺结合球蛋白的合成。肝脏及肝脏疾病与甲状腺激素关系方面的文献很多,但有关婴儿肝炎综合征(infantile hepatitis syndrome,IHS)甲状腺素水平的报道很少。本文研究IHS患儿血清甲状腺素水平与Child-Pugh肝功能分级的关系,探讨甲状腺素水平对于指导肝功能的分级、评价肝脏储备功能及其预后的临床意义。方法:收集住院的IHS患儿38例,选择20例健康儿作为正常对照组。应用放射免疫法检测各组血清促甲状腺素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平。检测IHS患儿血清白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、凝血酶原时间(PT),并记录腹水、肝性脑病等临床情况,按成人Child-Pugh分级标准,将患儿分为A、B、C三级,并将Child-Pugh积分与其甲状腺功能各指标做相关性分析。结果:1、IHS组患儿血清FT3、FT4水平显著低于正常对照组(P<0.05),TSH水平高于正常对照组水平(P<0.05);FT3、FT4水平随Child-Pugh积分增加而下降,A、B、C三级组间比较有显著性差异(P<0.05);TSH水平在三级组间无统计学差异(P>0.05)。2、HIS患儿的血清FT3、FT4水平与Child-Pugh积分呈负相关(r=-0.619～-0.80,P<0.01),与TSH无相关性(P>0.05)。结论:本研究结果显示婴儿肝炎综合征患儿的血清FT3、FT4水平降低,且与其肝脏受损程度有明显的相关性,因此检测血清FT3、FT4水平,对正确评估婴儿肝炎综合征病情严重程度及其预后具有重要的参考价值。
- 朱晓琳吴斌卢建双徐海捷王小众
- 关键词：婴儿肝炎综合征甲状腺素CHILD-PUGH
- 靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响
- 2009年
- 目的构建并鉴定靶向HBVX蛋白（HBx）小干扰RNA（siRNA）重组表达质粒，观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702／HBx线粒体功能的影响。方法设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列，克隆至载体psiRNA—Hh1GFPzeo中，构建重组表达质粒pX1和pX2，并以不针对任何序列的重组质粒pScr作为对照。通过脂质体介导转染入HL-7702／HBx肝细胞株，RT—PCR及Western印迹检测其对HBx的阻抑效应。流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位（Δψm）水平的变化。采用方差分析对实验结果进行统计分析。结果酶切鉴定和测序结果证实pX1和pX2构建成功。pScr、pX1、pX2分别转染入HL-7702／HBx细胞48h后，空白对照组HBxmRNA和蛋白表达水平分别为0．65±0．12和0．62±0．09，pX1组分别为0．33±0．10和0．19±0．08，明显低于空白对照组（t=4．73，P〈0．05；t=7．53，P〈0．05），pX2组分别为0．48±0．10和0．37±0．11，亦明显低于空白对照组（t=2．39，P〈0．05；t=4．43，P〈0．05），但pXl组抑制效果强于pX2组（t=2．28，P〈0．05）。RNA干扰后细胞内ROS水平为5．00±0．38，Aqrm水平为33．864-0．50；空白对照组ROS为72．10±0．55，AWm为3．57±0．26（t=276．22，P〈0．05；t=107．15，P〈0．05）。结论靶向HBx的siRNA能特异性抑制HBx在HL-7702／HBx细胞中的表达，并降低细胞内ROS水平，提高AWm水平，减轻细胞内氧化应激反应。
- 黄嵘峰林纳陈红英陈治新王小众
- 关键词：病毒蛋白质类膜电位
- 舒林酸对HBV X基因转染的肝癌细胞Wnt信号通路的影响被引量：5
- 2010年
- 目的探讨非甾体类抗炎药舒林酸(Sulindac)对HBV X基因转染的人肝癌SMMC7721细胞系Wnt信号通路的影响。方法用脂质体转染方法将HBx真核表达载体pcDNA3-X瞬时转染SMMC7721细胞(SMMC7721/HBx),以转染空载体pcDNA3的SMMC7721细胞组(SMMC7721/pcDNA3)及未转染质粒的SMMC7721细胞组(SMMC7721)为对照,于转染后72 h用RT-PCR和Western blot检测HBx的表达;并以各种浓度的舒林酸于瞬时转染后24 h干预SMMC7721/HBx组和SMMC7721/pcDNA3组至72 h,Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin的表达,Western blot检测cyclinD1的表达。结果RT-PCR和Western blot显示,SMMC7721/HBx组在RNA及蛋白水平均有HBx的表达,而SMMC7721/pcDNA3组及SMMC7721组均无表达。与SMMC7721/pcD-NA3组及SMMC7721组相比,Western blot示SMMC7721/HBx组β-catenin、cyclinD1的表达水平较高,免疫细胞化学显示SMMC7721/HBx组β-catenin的表达水平较高,核染色较深,而SMMC7721/pcDNA3组及SMMC7721组之间则无明显差异。Westernblot和免疫细胞化学示一定浓度的舒林酸干预SMMC7721/HBx组和SMMC7721/pcDNA3组细胞48 h后可下调β-catenin和cy-clinD1的表达,而对SMMC7721/HBx组的下调较SMMC7721/pcDNA3组明显。结论HBx基因成功瞬时转染入SMMC7721细胞,激活Wnt信号通路,并同时上调cyclinD1的表达。舒林酸可通过下调β-catenin抑制肝癌细胞的Wnt信号通路,下调cyclinD1的表达,且HBx阳性的肝癌细胞对舒林酸较敏感。
- 黄伟平黄月红陈治新陈红英王小众
- 关键词：肝癌WNT信号通路舒林酸X基因
- HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:研究HBV X基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响。方法:将HBV X基因真核表达载体pCDNA3-X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL-7702细胞,经过2周G418筛选,获得稳定表达的新细胞株,分别命名为HL-7702/HBx和H-7702/pcDNA3,RT-PCR和Western blot方法证实HBV X基因在HL-7702/HBx细胞内的稳定表达。抽提细胞总RNA进行半定量RT-PCR及分离细胞线粒体进行Western blot检测COXⅢ表达水平变化,并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性。结果:重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选,RT-PCR和Western blot分析结果显示HL-7702-HBx细胞能够稳定表达HBV X基因。RT-PCR和Western blot结果发现HBV X基因下调COXⅢ蛋白表达而不影响mRNA水平表达。酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低。结论:HBV X基因通过转录后水平调节COXⅢ表达,HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性。
- 林纳李丹陈红英陈治新王小众
- 关键词：HBXCOX
- 乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。
- 李丹丁健林纳王小众
- 关键词：肝炎病毒乙型PRES1蛋白
- 乙肝病毒X基因慢病毒载体的构建和鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白的重组慢病毒载体pRRLsincPPT-hPGK-X-IRES-eGFP-WPRE(pRRL-X),并感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,以验证其在体外的感染效率。方法采用PCR技术扩增出HBV X基因的DNA片段,用IN-Fusion技术构建表达载体pRRL-X并鉴定,jet-PEI转染试剂与三质粒共转染293T细胞后浓缩、计算慢病毒颗粒的滴度;用慢病毒液感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后初步观察慢病毒颗粒的感染情况。Real-time PCR和Western blot法检测细胞HBV X基因的表达。结果成功构建HBV X基因的慢病毒表达载体质粒pRRL-X。经293T细胞包装后,用慢病毒感染正常组织来源的人肝细胞HL-7702,120 h后被感染的细胞内可见强弱不等的荧光。结论成功构建HBV X慢病毒表达载体。
- 陈豪李丹林纳黄月红陈志新王小众
- 关键词：质粒慢病毒感染慢病毒属聚合酶链反应
- 乙型肝炎病毒X蛋白与细胞色素c氧化酶Ⅲ的特异性结合被引量：3
- 2008年
- 目的探讨HBVX蛋白与细胞色素c氧化酶Ⅲ（COXⅢ）之间的结合作用。方法采用交合实验验证HBVX蛋白和COXⅢ在酵母细胞内的结合作用，利用离体结合实验证实两者在体外的结合作用，采用免疫共沉淀实验证实两者在哺乳动物细胞中的结合作用。结果携带CoXⅢ基因的酵母与携带X基因的酵母交合后发生反应，β-半乳糖苷酶（LacZ）活性检测菌落呈现蓝色，离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带，提示X蛋白和COXⅢ在体外存在直接相互作用，免疫共沉淀实验在相对分子质量为17000处出现蛋白条带，提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到X蛋白和COXⅢ的特异结合。结论COXⅢ与X蛋白在原核细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合，HBV可能通过此反应干扰线粒体呼吸链功能及能量代谢过程。
- 李丹丁健林纳陈治新陈丰霖王小众
- 关键词：病毒蛋白质类免疫共沉淀
