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抗迟钝爱德华氏菌卵黄抗体制备及其抑菌、吞噬调理活性分析被引量：2: 2018年; 迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是常见人畜共患病病原.为获得高效抗E.tarda卵黄抗体(Immunoglobulin of Yolk,IgY),将纯培养的迟钝爱德华氏菌灭活,免疫蛋鸡,由蛋黄纯化IgY,用间接ELISA法检测IgY效价.对制备的IgY进行了抑菌活性检测和动物保护实验:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×10~3 CFU·mL^(-1))孵育,涂平板,菌落计数;分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(2×108 CFU·mL^(-1))等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),记录各组成活率.检测抗E.tarda IgY的吞噬调理活性:分别将抗E.tarda IgY、普通鸡蛋IgY与E.tarda(103 CFU·mL^(-1))及小鼠血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果发现:制备的IgY质量浓度为8.8 mg·mL^(-1),每个鸡蛋可以获得IgY约130 mg,效价为1:10 240;体外相对抑菌率为86.6%;对克氏原螯虾的平均保护率为66.7%;能促进细胞吞噬E.tarda,相对吞噬率为79.8%.; 顾叶华李登峰周永强; 关键词：迟钝爱德华氏菌卵黄抗体抑菌活性

抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究被引量：5: 2012年; 鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗L.anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies,IgY),用纯培养的L.anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与Na2SO4盐析、透析法由蛋黄分离纯化IgY.对制备的IgY进行了体内、外抑菌与吞噬调理活性研究:分别将抗L.anguillarum的IgY、由普通鸡蛋IgY与L.anguillarum(103CFU.mL-1)等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),计算成活率;分别将抗L.anguillarum的IgY、普通鸡蛋IgY与L.anguillarum(106CFU.mL-1)及血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果表明,提取的IgY浓度为8.93mg.mL-1,每个鸡蛋可获得IgY约120 mg,抗体纯度较高,效价为1:20480;体外抑菌率为65%;能促进细胞吞噬L.anguillarum,相对吞噬率为75%;对克氏原螯虾的保护率为33.3%.; 周永强李登峰刘联国郭安南陈炯王重彬; 关键词：鳗利斯顿氏菌卵黄抗体抑菌活性

重组甲鱼载脂蛋白B的研制及其阻断STSSSV感染的活性初探: 2020年; 为了制备甲鱼(Pelodiscus sinensis)载脂蛋白B(Pelodiscus sinensis Apolipoprotein B,PApoB)基因的原核表达产物,并探索其是否具有阻断甲鱼系统性败血症球状病毒(Soft-shelled Turtle Systemic Septicemia Spherical Virus,STSSSV)感染的功能,为最终控制和防治甲鱼系统性败血症疾病奠定基础,构建了PApoB的原核表达系统,纯化了重组PApoB,并将其用于阻断STSSSV感染的分析:根据甲鱼PApoB的基因序列,设计引物,扩增其第9932-11209bp(3294-3696 aa)区段,将其连接至表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌Rosetta株,经硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并用亲和层析法纯化获得了重组PApoB;将FITC标记的STSSSV与PApoB孵育后对甲鱼细胞进行攻毒,显微镜下PApoB添加组的病毒荧光信号明显低于非添加组,表明该重组蛋白可以阻断STSSSV的感染.; 许丽华顾叶华陈梅娟李登峰; 关键词：甲鱼载脂蛋白B 原核表达

HRCA技术检测中华鳖虹彩病毒被引量：3: 2013年; 【目的】中华鳖虹彩病毒(STIV)是甲鱼重要的病毒性病原之一,建立特异性好、灵敏度高的中华鳖虹彩病毒超分支滚环扩增体系(HRCA),对STIV进行快速、准确地检测。【方法】根据中华鳖虹彩病毒(STIV)独有的基因序列和锁式探针公共连接序列分别设计特异性的锁式探针及其扩增引物,对HRCA的系列反应条件进行优化,验证该方法的特异性和灵敏度,并用该方法对感染STIV显症和未显症的甲鱼组织进行检测。【结果】10 nmol/L探针经T4 DNA连接酶作用20 min环化,Bst DNA聚合酶大片段扩增20 min即可获得很好的检测效果。特异性试验表明,在多种待检病毒样中,HRCA能特异地检测出STIV,同时HRCA具有极高的灵敏度,能检测出的最低模板量为101拷贝,而常规PCR的检测下限为103拷贝,对显症和尚未显症的感染早期甲鱼组织的检测结果均为阳性。【结论】建立的中华鳖虹彩病毒HRCA检测体系具有灵敏、快速、简便等特点,能从组织样品中准确地检测出STIV,可以用于该类疾病的早期诊断,具有较好的推广前景。; 彭姣王洪强李登峰陈炯周永强顾晓英刘联国

基于IgY的ELISA定量检测甲鱼系统性败血症球状病毒被引量：2: 2016年; 为了对甲鱼系统性败血症球状病毒（STSSSV）进行快速检测,以抗STSSSV卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,Ig Y）为一抗,以羊抗鸡Ig G（HRP-Ig G）为二抗,建立STSSSV检测的间接酶联免疫吸附（ELISA）与血凝抑制（HI）实验,对两者进行了比较.运用ELISA对感染病毒甲鱼的血清、肝脏、粪便、及饲养环境水样进行了STSSSV检测.用ELISA分析了病毒稀释倍数及其2的对数值与OD492nm值间的线性关系,建立STSSSV的ELISA定量检测方法.结果显示：ELISA较HI更灵敏,其对STSSSV的检测灵敏度为3.98 ng·m L-1,能够在携带该病毒尚未显症的隐性感染的甲鱼血清和甲鱼粪便与养殖水中检测出STSSSV.ELISA对其他水产病毒无交叉反应,特异性强.ELISA定量检测限度范围为0.031~4μg·m L-1.本研究建立的间接ELISA方法为STSSSV的定性、定量提供了准确有效的检测手段.; 夏小磊李登峰彭姣周永强郭安南刘联国陈炯; 关键词：卵黄抗体酶联免疫吸附实验

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浙江省公益性技术应用研究计划项目(2011C32004)