山西省科技攻关计划项目(20100321101)
- 作品数:6 被引量:23H指数:2
- 相关作者:王转花崔晓东李玉英李平白承之更多>>
- 相关机构:山西大学更多>>
- 发文基金:山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金太原市科技创新计划项目更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 截短型rBTI的表达、纯化及其对EC9706细胞生长的抑制作用被引量:1
- 2011年
- 依据先前获得的重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)氨基酸序列及三维分子构像,分别构建了rBTI C末端缺失VVM、TPVVM或VDTPVVM的截短型pExsecI-BTI-t1,pExsecI-BTI-t2和pExsecI-BTI-t3重组质粒.转入大肠杆菌BL21中进行表达,并通过Resource Q阴离子交换层析分离.实验结果显示,3个工程菌均以可溶方式表达,目的蛋白在SDS-PAGE图谱中显示单一条带,其纯度达98%以上.理化性质分析表明,截短型rBTI与野生型rBTI具有相似的胰蛋白酶抑制活性,并具有很好的热稳定性及酸碱稳定性.将野生型和截短型rBTI分别作用于人食管癌EC9706细胞.MTT检测发现,C末端截短不同数目的氨基酸后,与野生型rBTI相比,在相同浓度下截短型rBTI仍具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,其抑制作用范围是截短前的50%左右.这些结果提示,rBTI的C末端氨基酸残基缺失未引起活性区域或功能部位的较大改变,从而保留了其对胰蛋白酶的抑制作用和部分生物学功能.
- 李静舒李玉英崔晓东王转花
- 关键词:理化性质细胞凋亡
- Cupin家族食物性过敏原表位研究进展被引量:8
- 2011年
- Cupin蛋白家族是一个具有多种功能蛋白的家族,它的进化可以追溯到从古细菌、细菌到真核生物。cupin来源于拉丁语"cupa",是指由至少6个β-折叠片形成的桶状结构。根据蛋白中含有cupin结构域的数目而把它们分类成不同的cupin亚群。具有两个cupin结构域的蛋白最初是在高等植物种子储藏蛋白中发现的。它们分为7S球蛋白三聚体(豌豆球蛋白)和11S球蛋白六聚体(豆球蛋白)。
- 李平王转花
- 关键词:食物过敏原表位关键氨基酸
- 特异性过敏原TBt多克隆抗体的制备与鉴定被引量:1
- 2011年
- 目的:制备特异性苦荞主要过敏原TB t的多克隆抗体,为深入研究TB t分子中各结构域的功能奠定基础。方法:通过盐析,离子交换层析,分子筛层析等方法从苦荞种子中纯化出过敏蛋白TB t,免疫新西兰兔子,制备多克隆抗体。用间接ELISA、W estern b lot检测该抗体的效价和特异性;竞争ELISA研究IgG抗体对TB t过敏患者血清IgE的抑制作用。结果:间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶256 000左右;W estern b lot显示该抗体能与TB t蛋白特异结合;竞争ELISA表明制备的IgG抗体能够特异性抑制荞麦过敏患者血清IgE与过敏蛋白的结合。结论:制备的TB t多抗血清具有较高的效价和良好的特异性,该多克隆抗体可用于TB t的免疫活性鉴定,为下一步研究该蛋白的分子特征及免疫治疗奠定了基础。
- 杨振煌崔晓东李平李玉英王转花
- 关键词:苦荞多克隆抗体
- 一种薏苡抗真菌蛋白的制备及抑菌活性研究被引量:10
- 2012年
- 以薏苡(Coix chinensis)种子为实验材料,通过脱脂、水提、Resource S阳离子交换层析和Superdex 75凝胶排阻层析等步骤纯化得到一种新的抗真菌蛋白,并对其抑菌活性进行初步鉴定。SDS-PAGE分析显示该蛋白的分子质量约为28kD。抑菌活性鉴定表明,该蛋白对链格孢霉(Alternaria alternate)、绿色木霉(Trichoderma reesei)和白腐菌(Panus conchatus)3株丝状真菌具有显著的生长抑制活性,并呈现出剂量依赖的特征。本研究建立分离薏苡28kD抗真菌蛋白的方法,制备方法简单易行,所得产品纯度达到95%以上。
- 李晨白承之李玉英王转花
- 关键词:抗真菌蛋白纯化
- 荞麦过敏原特异性抗体酶联免疫吸附法检测试剂制备被引量:2
- 2011年
- 以天然苦荞过敏蛋白包被聚苯乙烯微孔板,以鼠抗人IgE抗体标记辣根过氧化物酶,以间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,IELISA)检测病人血清中的特异性抗体,分析并建立关键操作步骤及反应条件。结果表明:ELISA反应的最适工作条件为包被的抗原质量浓度100μg/mL、阳性血清稀释度1:50、酶标二抗稀释度1:1000,37℃时封闭的最佳时间为40min,包被抗原与阳性血清中抗体的最佳作用时间为40min,阳性血清与酶标二抗的最佳作用时间为40min。本方法具有良好的特异性、重复性和精密度。
- 张昕崔晓东王转花
- 关键词:苦荞试剂盒
- 苦荞芦丁水解酶的最适作用条件及Cu^2+对酶活性的抑制被引量:2
- 2012年
- 干燥的苦荞麦种子粉碎后经20mmol/L的醋酸盐缓冲液抽提,Resource Q和Superdex G75 HR 10/300凝胶柱分离纯化,得到一种芦丁水解酶,测定该酶的最适作用条件,研究Cu2+对该酶的抑制作用。结果表明:苦荞芦丁水解酶的分子质量约70kD,最适作用pH值为5.0。反应体系选择20%乙醇时,可保留酶的活性不被抑制,当乙醇体积分数大于50%时,对酶的活性抑制率达90%以上,表明可选用低体积分数乙醇作为芦丁的溶剂,用于芦丁水解酶测活体系及后续槲皮素制备研究。荧光光谱表明,Cu2+与芦丁水解酶以物质的量比1:1的形成稳定的复合物,可以使酶的荧光发生猝灭,水解芦丁的活性降低。表明Cu2+对芦丁水解酶有抑制作用。
- 崔晓东王转花
- 关键词:苦荞芦丁槲皮素荧光光谱