甘肃省科技重大专项计划(092NKDA031)
- 作品数：8 被引量：57H指数：6
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- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学中国农业科学院更多>>
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- 用反向线性印迹方法检测和区分马泰勒虫和驽巴贝斯虫的研究
- 目的:马梨形虫病是由蜱媒介传播的两种原虫引起的一类寄生虫病,在我国北方和南方均有分布,危害严重。为了了解国内外马梨形虫流行状况和分布范围,需要建立一种能同时诊断和鉴别马梨形虫病不同病原的分子流行病学调查方法。方法:在对本...
- 谢俊仁刘光远田占成罗金沈辉
- 文献传递
- 基于环形泰勒虫Tams1基因多态性的二温式-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 【目的】环形泰勒虫作为牛科动物重要的血液原虫对养牛业产生了重大危害。近年来针对该病原Tams1基因的诊断方法及候选疫苗筛选进行了大量工作。但研究证明该基因多态性对诊断及免疫效果存在影响。基于此,本研究对Tams1基因多态性特征进行了分析,并为该病的诊断建立一种实施有效的检测方法。【方法】参考GenBank中公布的环形泰勒虫Tams1基因的核苷酸序列,设计特异性引物。PCR扩增,获得了846 bp的核苷酸片段。将该基因片段与GenBank中主要的12种已知不同区域虫株的相应氨基酸序列进行比较分析。在保守区设计引物,以Tams1基因标准阳性质粒为模板建立环形泰勒虫病的二温式-PCR检测方法。经优化的方法用于田间样品的检测。【结果】该基因编码281个氨基酸,碱性氨基酸48个,酸性氨基酸42个,疏水性氨基酸100个。系统发生树结果显示,环形泰勒虫甘肃株与安哥拉、土耳其、巴林地方株亲缘关系较近。新疆株与意大利、西班牙地方株关系较近,而与甘肃株亲缘关系相对较远。这一结果通过环形泰勒虫不同国家地方株的氨基酸序列对齐结果可以得到进一步的说明。建立的二温式-PCR检测方法,可检测到0.31 fg.μL-1血液中感染虫体的量。特异性结果表明,仅有环形泰勒虫基因组DNA检测为阳性,其它对照虫种基因组模板均表现为阴性,且与感染牛的其它梨形虫无交叉反应。本实验建立的环形泰勒虫二温式-PCR方法对收集的335份野外样品进行检测,阳性检出率为16.33%,显微镜检测阳性率为2.25%,两者符合率100%。与普通PCR比较,二温式-PCR在敏感性方面没有显著差异,但其特异性更高,且该方法反复升温降温时间消耗短。【结论】环形泰勒虫Tams1基因不同地方株存在明显的差异。其氨基酸序列的多态性特征差异显著。因此该基因作为潜在候选抗原应注重多肽疫苗的设计�
- 罗金刘光远田占成谢俊仁
- 关键词：环形泰勒虫多态性
- 马梨形虫病的流行规律和诊断与检测方法研究进展
- 近年来马梨形虫在我国的流行呈上升趋势,基层兽医工作人员对该病的了解相对有限,而且检测和诊断该病的方法也非常落后,常发生误诊,给畜牧业造成严重损失。对该病的病原驽巴贝斯虫和马泰勒虫的生物学特性以及流行规律并不完全清楚,对制...
- 谢俊仁田占成罗金沈辉刘光远
- 关键词：马梨形虫病驽巴贝斯虫
- 文献传递
- 用环介导恒温扩增技术检测马梨形虫病方法的构建
- 目的:本研究利用环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以相对保守的马梨形虫18S rRNA基因为靶基因,分别建立鉴别马泰勒虫和驽巴贝斯虫的LAMP检...
- 谢俊仁田占成罗金沈辉刘光远
- 文献传递
- 基于18S rRNA基因序列的我国马梨形虫分类学地位分析被引量：17
- 2011年
- 为从分子水平上阐明我国马梨形虫的种属分类特征。根据GenBank中登录的马梨形虫18SrRNA基因序列,在其高变区设计引物。PCR扩增获得大小分别为913bp、451bp的目的片段。将该片段克隆至pMD-18T载体后进行序列测定,并和GenBank上登录的其他地方株梨形虫18SrRNA基因序列进行同一性分析并构建系统发生树。分析显示,之前被称作马巴贝斯虫的虫种和泰勒虫虫种有着更密切的亲缘关系,在进化发育过程中处于同一种系,而与巴贝斯虫为明显的2个分支。我国驽巴贝斯虫肇源株与西班牙分离株(AY534883.1)仅有较小差异,其同源性高达91.8%。马泰勒虫肇源株与西班牙分离株(DQ287951.1,AY150064.2)同源性均高于91.4%。以上分析显示我国马梨形虫地方株和西班牙地方株亲缘关系最近,而与其他地方株差异相对较大。因此我国肇源株马梨形虫和西班牙地方株同属于Atbara8。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁张萍
- 关键词：驽巴贝斯虫RRNA分类学
- 18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用被引量：3
- 2012年
- 为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛
- 关键词：泰勒虫分类学RRNA
- RPS8-巴贝斯虫和泰勒虫发育遗传标记基因
- 目的梨形虫(包括巴贝斯虫和泰勒虫)是一类蜱传性血液原虫,在脊椎动物,主要寄生于红细胞或淋巴细胞内。尽管经验丰富的传统分类学家可以鉴定目前已知的国内流行的梨形虫虫种,但对于一些未知梨形虫虫种,特别是形态相近,生活史相似的梨...
- 田占成陈荣贵赵卫东刘光远殷宏罗建勋关贵全罗金谢俊仁沈辉田美媛郑进峰袁小松王芳芳
- 关键词：梨形虫系统进化分析
- 文献传递
- RPS8-巴贝斯虫和泰勒虫发育遗传标记基因
- 梨形虫(包括巴贝斯虫和泰勒虫)是一类蜱传性血液原虫,在脊椎动物,主要寄生于红细胞或淋巴细胞内。尽管经验丰富的传统分类学家可以鉴定目前已知的国内流行的梨形虫虫种,但对于一些未知梨形虫虫种,特别是形态相近,生活史相似的梨形虫...
- 田占成陈荣责赵卫东刘光远殷宏罗建勋关贵全罗金谢俊仁沈辉田美媛郑进峰袁小松王芳芳
- 关键词：梨形虫系统进化分析
- 马泰勒虫病PCR检测方法的建立和应用被引量：11
- 2012年
- 为寻求一种快速、有效的马泰勒虫(Theileria equi,T.equi)PCR检测方法。基于马泰勒虫18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计特异性引物Te-18F、Te-18R,通过PCR技术获得了531bp的核酸片段。用该引物对马泰勒虫、马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合样本、驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫基因组模板进行特异性试验。同时对马泰勒虫基因组模板进行不同浓度稀释后扩增,以便于确定试验的敏感性。用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对45份马属动物血样进行检测。特异性试验显示,在被检测的9个样本中,只有马泰勒虫及马泰勒虫和驽巴贝斯虫混合模板中扩增出了符合大小的特异核酸片段。驽巴贝斯虫、尤氏泰勒虫、中华泰勒虫、环形泰勒虫、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫和瑟氏泰勒虫的扩增结果均为阴性。灵敏度试验结果表明,PCR对马泰勒虫的扩增效率可达到10-13。对本试验建立的PCR检测马泰勒虫方法评估结果显示,PCR对马泰勒虫的检出率为17.78%(8/45),显微镜镜检结果只有8.89%(4/45)两者的符合率为100%。本试验建立的马泰勒虫PCR检测方法不失,为一种好的检测方法。
- 罗金刘光远谢俊仁田占成党根生
- 关键词：PCR诊断方法
- 马泰勒虫EMA1基因的克隆与生物学特性分析被引量：11
- 2012年
- 根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达载体pET-30a后进行表达,并纯化表达的重组蛋白,进行Western-blotting试验,以鉴定其生物学活性。结果,EMA1基因长819bp,编码272个氨基酸,将该基因编码蛋白的氨基酸序列与GenBank中登录的11种已知梨形虫的相应氨基酸序列进行比较分析,马泰勒虫肇源分离株与已报道的马泰勒虫(马巴贝斯虫)亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫和斑羚泰勒虫,而与东方泰勒虫、瑟氏泰勒虫的亲缘关系较远。表达的重组蛋白是分子质量约为38ku的融合蛋白,且表达产物能被马泰勒虫标准阳性血清识别。结果表明,马泰勒虫EMA1作为一种良好的抗原分子,在虫株的分类学研究、流行病学调查以及候选疫苗的研制中有着重要的意义。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛
- 关键词：克隆系统发育
