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人脐静脉内皮细胞的原代培养及鉴定被引量：6: 2012年; 目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外培养模型,并对其进行鉴定,为体外血管内皮细胞及相关疾病的研究搭建桥梁。方法采用0.1%Ⅰ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含20%胎牛血清,80%M199不完全培养基,1%终浓度为50μg/mL内皮细胞生长复合物,1%终浓度为100μg/mL肝素钠,1%青-链霉素,1%L-谷氨酰胺)中培养,待细胞80%以上融合后,用0.25%的胰酶和0.25%的EDTA消化传代,并在倒置显微镜下观察细胞形态,用免疫荧光法对细胞进行鉴定。结果原代培养的HUVECs在24 h后完全贴壁,2～3 d可达80%的融合,倒置显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排布,免疫荧光显示细胞胞浆中Ⅷ因子相关抗原阳性。结论 0.1%Ⅰ型胶原酶消化HUVECs方法便于操作,细胞获得量多且生长状态良好。; 孙慧琳湛奕刘珍珍李筠蔡德鸿; 关键词：人脐静脉内皮细胞细胞原代培养

GLP-1通过NOX4信号通路拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤被引量：4: 2016年; 【目的】探讨NOX4信号通路在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)拮抗糖基化终末产物(AGE)诱导的内皮细胞氧化损伤的作用机制。【方法】实验组分为对照组、AGE组、AGE+GLP-1组、AGE+NOX4 si RNA组及AGE+阴性si RNA组,RTPCR检测NOX4 m RNA表达,Western Blotting技术检测NOX4蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率、ROS生成水平。【结果】与对照组相比,AGE可诱导细胞NOX4蛋白表达(P=0.001)及NOX4 m RNA表达(P<0.05)明显增高;加入GLP-1后,增高的NOX4蛋白(P=0.003)及NOX4 m RNA(P<0.05)明显下降。与AGE组相比,NOX4 si RNA可抑制AGE诱导的ROS生成(P=0.011)、细胞凋亡(P<0.05);阴性si RNA对AGE诱导的ROS生成(P=0.958)、细胞凋亡(P=0.169)无明显影响。【结论】GLP-1至少部分通过抑制NOX4蛋白表达拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤。; 孙慧琳黄志秋曾海龙张艺能莫旭旭陈宏; 关键词：胰高血糖素样肽-1 人脐静脉内皮细胞

p38MAPK/eNOS信号通道在胰高血糖素样肽-1抑制AGEs诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用被引量：10: 2016年; 目的探讨p38MAPK信号通道在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)拮抗糖基化终末产物(AGEs)诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。方法实验组分为对照组、AGEs组、GLP-1组、AGEs+GLP-1组、AGEs+抑制剂组及AGEs+GLP-1+抑制剂组,western blot技术检测p-p38MAPK/p38MAPK、p-e NOS/e NOS蛋白表达情况,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与对照相比较,单独加入AGEs或GLP-1可分别导致p-p38MAPK蛋白表达水平明显上升(P=0.001)或下降(P<0.001);与对照组相比AGEs可显著降低p-e NOS表达水平(P=0.007),而予以GLP-1或p38MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,受抑制的e NOS蛋白表达水平再次显著升高(P=0.004);在AGEs组加入SB203580或GLP-1预处理后,AGEs诱导的细胞凋亡率均显著下降(P<0.001,P<0.001)。结论 GLP-1至少部分通过抑制p38MAPK蛋白磷酸化,上调磷酸化e NOS蛋白的表达,对人脐静脉内皮细胞起到抗凋亡的保护作用。; 曾海龙黄志秋张艺能孙慧琳; 关键词：胰高血糖素样肽-1 P38MAPK 人脐静脉内皮细胞内皮细胞损伤糖基化终末产物

胰高血糖素样肽-1对糖基化终末产物诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用被引量：6: 2013年; 糖尿病发病率逐年攀升，血管并发症是其致残致死的主要原因，内皮功能障碍可导致一系列血管并发症．如动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）、; 孙慧琳刘珍珍李琼湛奕蔡德鸿; 关键词：胰高血糖素样肽-1 血管内皮细胞损伤糖基化终末产物血管并发症动脉粥样硬化内皮功能障碍

p38MAPK-eNOS-N0信号通路在人脐静脉内皮细胞凋亡中的保护作用被引量：9: 2016年; 目的探讨p38MAPK信号通路在胰高血糖素样肽1(GLP-1)拮抗人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法实验分为对照组、糖基化终末产物(AGE)组、GLP-1组、AGE+GLP-1组、AGE+SB203580组、AGE+GLP-1+SB203580组及AGE+GLP-1+L-NAME组,Western blot检测p-p38MAPK/p38MAPK、磷酸化内皮型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS/eNOS)蛋白表达情况,NO检测试剂盒(一步法)检测NO含量,DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(ROS)含量,Annexin V/PI流式检测细胞凋亡率。结果与AGE组相比,GLP-1预处理可诱导p-p38MAPK蛋白表达下降(P=0.000);与对照组比较,GLP-1或p38 MAPK抑制剂(SB203580)预处理后,受AGE抑制的eNOS蛋白表达或诱导的ROS水平分别显著升高(P=0.004)或下降(P=0.000);GLP-1预处理后,因AGE诱导的细胞凋亡率显著降低(P=0.000),而加入L-NAME后,GLP-1的抗凋亡作用显著减弱(P=0.002);GLP-1预处理后,细胞NO含量较单纯AGE组明显升高(P=0.000),而予以L-NAME后,细胞NO含量显著降低(P=0.011)。结论GLP-1可抑制p38 MAPK信号通路的活化,拮抗AGE对血管内皮细胞的氧化损伤;上调eNOS蛋白的表达,拮抗AGE诱导的内皮细胞NO生成障碍及细胞凋亡,从而延缓糖尿病合并动脉粥样硬化的发生发展。; 孙慧琳黄志秋曾海龙张艺能刘一鸣; 关键词：胰高血糖素样肽1 P38MAPK 人脐静脉内皮细胞

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广东省自然科学基金(S2011010002074)

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