国家自然科学基金(30901821)
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
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- 构建靶向性载脂蛋白E修饰脂质体介导的HSVtk/丙氧鸟苷系统被引量：1
- 2015年
- 背景:自杀基因系统无选择性,不仅能杀伤癌细胞,对正常细胞也有同样作用,所以构建靶向性基因治疗载体成为迫切需要解决的问题。目的:评价载脂蛋白E修饰脂质体(apo E-lipoplexes)介导TK/丙氧鸟苷自杀基因质粒转染对Li-7肝癌细胞的杀伤效果。方法:apo E-lipoplexes包裹p AFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒转染Li-7细胞,筛选HSVtk稳定表达细胞克隆(Li-7-tk),荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达,Western blotting检测HSVtk基因表达,MTT法评价HSVtk/丙氧鸟苷系统对Li-7肝癌细胞的杀伤作用。结果与结论:自杀基因质粒转染Li-7细胞经筛选得到稳定克隆(Li-7-tk),HSVtk/丙氧鸟苷系统作用于Li-7细胞后,细胞凋亡明显增加(P<0.01)。在甲胎蛋白阳性的Li-7肝癌细胞中,自杀基因载体稳定表达并有效杀灭癌细胞。
- 张悦红高然朋于保锋王惠珍张栋弓韬郭睿王海龙程牛亮解军牛凯秦琴徐钧
- 关键词：脂质体甲胎蛋白肝癌细胞增强型绿色荧光蛋白
- 载脂蛋白E修饰脂质体介导pGenesil-1质粒高效转染HL-7702肝细胞
- 2015年
- 我们将肝靶向蛋白载脂蛋白E（apoE）与脂质体结合[1-2],构建apoE修饰脂质体（apoE-lipoplexes）,提高基因对肝细胞的转染效率.
- 于保锋高然朋李春锋莱智勇牛凯秦琴解军徐钧
- 关键词：载脂蛋白E脂质体介导肝细胞质粒APOE转染效率
- Construction of plasmid vector pAFP-HSVtk-IRES2-EGFP and its effect on the cytotoxicity of ganciclovir to hepatocellular carcinoma被引量：6
- 2014年
- Lai ZhiyongQin QinYu BaofengXie JunGao RanpengZhang TiantianLi ChunfengNiu KaiXu Jun
- 关键词：WESTERN印迹法自杀基因DNA复制
- 载脂蛋白ApoE修饰脂质体对肝癌细胞的靶向转染被引量：3
- 2014年
- 目的 将载脂蛋白E （ApoE）和普通脂质体（Lipoplexes）耦联,构建一种具有肝癌细胞靶向性的基因转运载体ApoE-Lipoplexes,以提高转染效率.方法 将ApoE与Lipoplexes耦联,形成ApoE-Lipoplexes,分别用两种载体包裹pGenesil-1质粒并转染HepG2和Huh-7肝癌细胞,用倒置荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达,并用流式细胞仪检测转染效率,比较两种载体对肝癌细胞的转染效率.结果 构建了粒径150 nm的Lipoplexes和ApoE-Lipoplexes两种脂质体,Lipoplexes对HepG2和Huh-7的转染效率分别为（4.7±1.4）％和（21.0±0.6）％,ApoE-Lipoplexes的转染效率分别为（13.8±1.8）％和（51.5±1.8）％,ApoE-Lipoplexes对肝癌细胞的转染效率显著高于Lipoplexes（P＜0.05）.结论 成功构建一种对肝癌细胞具有较高转染效率的非病毒基因转运载体.
- 秦琴莱智勇高然朋牛凯于保锋解军徐钧
- 关键词：基因治疗载脂蛋白E靶向治疗
- 基于生物信息学的淋巴瘤相关蛋白T细胞因子4的性质及功能预测分析被引量：1
- 2020年
- 目的利用生物信息学软件分析淋巴瘤相关蛋白T细胞因子4(T cell factor 4,TCF4)的理化性质、空间结构、蛋白质修饰位点及蛋白相互作用关系。方法根据美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)蛋白数据库提供的人TCF7L2蛋白FASTA格式数据,使用ExPASy、SignalP 5.0 Server、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL、DISPHOS 1.3、PhosphoSitePlus、NetNGlyc 1.0、Uniprot数据库、NetOGlyc 4.0、YinOYang 1.2、STRING等软件对TCF4蛋白进行系统性分析。结果TCF4为一种碱性不稳定的亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜区;二级结构的主要形式是无规卷曲;在7款软件(DISPHOS 1.3、PhosphoSitePlus、KinasePhos、Scansite、NetPhosk、Musite、PlantPhos)中,共有33个磷酸化位点被重复预测到;Uniprot数据库和NetOGlyc 1.0软件未预测到重复的N型糖基化位点,NetOGlyc 4.0和YinOYang 1.2软件显示共有2个O型糖基化位点被重复预测到;蛋白相互作用网络显示,与TCF4形成蛋白网络的6个蛋白(EP300、MYC、CREBBP、CTNNB1、NLK和AXIN2)涉及到Wnt信号通路。结论经多种软件对TCF4的性质及功能的预测,为淋巴瘤等相关疾病抑制剂的研发及其发病机制提供参考。
- 穆秀丽文朝朝孟涛涛王晰魏艳弓韬孙公勤张宏伟于保锋
- 关键词：T细胞因子4淋巴瘤生物信息学蛋白相互作用
- 靶向药物联合应用对肝癌细胞SK-Hep-1增殖的影响及其机制
- 2022年
- 目的探讨靶向药物联合应用对多驱动基因调控增殖的肝癌细胞SK-Hep-1的影响及作用机制。方法利用对肝癌细胞SK-Hep-1敏感的靶向药物(HG6-64-1、dasatinib、crizotinib、sunitinib)绘制单靶点动力学分析曲线和双相分析曲线,对SK-Hep-1细胞进行动力学分析;Western blot法检测这些靶向药物对SK-Hep-1细胞关键信号通路的影响;MTT法检测这些药物单用和联合应用对SK-Hep-1细胞增殖的影响。结果与单靶点动力学分析曲线比较,双相分析曲线可更好拟合靶向药物对肝癌细胞SK-Hep-1的影响,并且预测出HG6-64-1、dasatinib和MK-2206三药联合应用能有效抑制SK-Hep-1细胞增殖。结论双相动力学分析可以更好地定量描述多驱动增殖的肝癌细胞SK-Hep-1对靶向治疗的反应,联合使用HG6-64-1、dasatinib和MK-2206是治疗肝癌潜在的药物组合。
- 朱晓霞贾瑜琦刘畅弓韬李高鹏张宏伟于保锋
- 关键词：靶向药物药物联合
- 肿瘤免疫调控新靶点YTHDF1蛋白分子结构及生物学功能分析被引量：1
- 2021年
- 目的分析肿瘤免疫调控新靶点YTH N6-甲基腺苷(m6A)RNA结合蛋白1[YTH N6-methyladenosine(m6A)RNA binding protein 1,YTHDF1]的分子结构及生物学功能。方法应用NCBI、ExPASy、SignalP、PSORTⅡ、SOPMA、STRING、SWISS-MODEL等软件工具分析YTHDF1蛋白的理化性质及其生物学功能,并通过MEGA 7软件建立YTHDF1蛋白的系统进化树。结果YTHDF1是一种不稳定的碱性亲水蛋白质,无信号肽,无跨膜区;YTHDF1在多种肿瘤中高表达,在胃肠道肿瘤中表达最高;YTHDF1可能部分或更多定位在细胞核中;YTHDF1的二级结构主要由无规则卷曲构成;与YTHDF1相互作用的蛋白质包括WTAP、METTL3、FTO、METTL14、ALKBH5,YTHDF1主要参与RNA的转录后修饰、mRNA剪切的调控及DNA损伤修复反应。YTHDF1蛋白在进化过程中高度保守。结论YTHDF1可能在细胞质中通过识别m6A提高蛋白翻译来促进肿瘤发生,也可能在细胞核中通过其他机制促进肿瘤发生。
- 王晰文朝朝魏艳王海龙郭睿赵虹张栋弓韬于保锋
- 关键词：肿瘤分子结构生物学功能
- Survivin启动子控制自杀基因HSV-TK真核表达载体对肝癌细胞杀伤活性的研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)对人肝癌细胞的特异性杀伤作用,推进该自杀基因治疗原发性肝癌的可行性,从而为肝癌靶向基因治疗奠定一定的基础。方法将pc DNA3.1-p Survivin-TK质粒转染人肝癌细胞Hep G2中,RT-PCR法检测自杀基因m RNA水平,Western blot法检测自杀基因蛋白量的表达;再次转染上述质粒到肝癌细胞Hep G2中,随着更昔洛韦(GCV)剂量的增加,来监测pc DNA3.1-p Survivin-TK重组载体对细胞的杀伤效果,CCK-8法检测GCV对肝癌细胞的毒性作用,流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果通过RT-PCR法、Western blot法表明了转染该重组质粒的Hep G2细胞可以成功表达TK基因;此外,在外源药物GCV作用下也实现了对肝癌细胞的特异杀伤,CCK-8法表明,随着药物浓度的增高质粒转染组细胞存活率逐渐下降;流式细胞术检测得知,细胞经GCV处理48 h后,转染pc DNA3.1-p Survivin-TK重组质粒的肝癌细胞组凋亡率约为(37.37±4.02)%,而未转染质粒组细胞凋亡率约为(1.00±0.62)%,两组间比较有统计学差异(P<0.01)。结论 HSV-TK/GCV自杀基因的毒性作用随着GCV浓度的增高而上升,并且HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞具有特异性靶向杀伤作用。
- 李勇芳张英敏赵娜孟凡秀张琪高然朋张悦红于保锋郭睿王海龙解军徐钧
- 关键词：胸苷激酶阳离子脂质体肝癌细胞SURVIVIN启动子
- 新型肿瘤免疫抑制靶点唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15的生物信息学预测被引量：2
- 2021年
- 目的预测唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15(sialic acid binding Ig like lectin-15,SIGLEC-15)的生物学信息。方法应用多种生物信息学工具对SIGLEC-15的理化性质、组织表达特异性、亚细胞定位、空间结构、翻译后修饰位点、蛋白相互作用等进行预测,同时建立SIGLEC-15的系统进化树,并进行分析。结果 SGLEC-15是一种碱性不稳定蛋白,具有亲水性,含有信号肽结构。SGLEC-15具有1个跨膜结构域,主要定位于细胞外(34.80%)、细胞膜(30.40%)、内质网(21.70%)和高尔基体(13.00%),在正常细胞及癌细胞中均有表达。SGLEC-15的高级结构弹性较大,拥有2个N-糖基化位点,1个O-糖基化位点及8个可能的蛋白磷酸化位点。SGLEC-15与TYROBP等4个蛋白具有高置信度的相互作用关系。人类SIGLEC-15与猩猩、白狨猴等灵长类动物SIGLEC-15的同源性最高,在脊椎动物进化过程中相对保守。结论 SIGLEC-15可作为肿瘤免疫抑制的靶点,为进一步肿瘤免疫疗法的研究奠定了基础。
- 文朝朝王晰魏艳李文龙王海龙郭睿赵虹张栋弓韬于保锋
- 关键词：肿瘤生物信息学
- 卵泡发育相关蛋白GPR173的理化性质及其结构预测分析
- 2021年
- 目的预测分析卵泡发育相关蛋白GPR173的理化性质及其结构特点。方法从NCBI数据库中下载GPR173氨基酸序列,利用多种生物信息学在线软件对其理化性质、信号肽、分泌蛋白类型、跨膜结构、亚细胞定位、位点修饰、空间结构及蛋白相互作用网络进行预测分析。结果 GPR173是一种碱性稳定疏水性蛋白,无典型信号肽,存在7个跨膜区,既不是经典型分泌蛋白,也不是非经典型分泌蛋白;作用于质膜的可能性最大;可能有10个蛋白激酶磷酸化位点,至少有2个O-糖基化位点;二级结构主要为α-螺旋,属7tmGPCRs超家族,且含1个7tmASREB3GPR173结构域;与GPR173可能存在相互作用的10个蛋白中,SMIM20与GPR173相互作用的可能性最大,GPR20可能性最小。结论 GPR173可能参与G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)信号通路进而发挥其作用。本文为下一步研究其生命活动及疾病发生功能机制提供了理论依据。
- 魏艳文朝朝王晰王海龙郭睿赵虹张栋弓韬孙公勤于保锋
- 关键词：卵泡G蛋白偶联受体生物信息学
