湖南省自然科学基金(03JJY3120)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 单细胞单轮二重PCR诊断X-连锁鱼鳞病被引量：1
- 2009年
- X-连锁鱼鳞病(X-linked ichthyosis,XLI)是隐性遗传病,是人类最常见的先天性代谢疾病之一.从单细胞水平诊断XLI,就可为开展XLI的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下基础.采用单轮二重PCR扩增患者和正常女性的单淋巴细胞以及正常人单卵裂球的STS基因和amelogenin(Amel)基因,在正常人单淋巴细胞组和正常人单卵裂球组中STS基因扩增成功率分别为95.8%、90.9%,在患者单淋巴细胞组中的假阳性率为1.5%;在Amel-X和Amel-Y基因位点扩增成功率分别为91.9%、92.7%,污染率分别为1.4%、0;ADO的发生率为6.2%.结果表明单细胞单轮二重PCR诊断XLI具有较高的准确性和特异性,有助于我们进一步开展XLI的PGD.
- 钟昌高李麓芸陆长富龚斐廖宏庆张瞻高佰笛张硕平卢光琇
- 杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断被引量：4
- 2009年
- 目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。
- 钟昌高李麓芸陆长富林戈龚斐张瞻廖宏庆张红卢光琇
- 关键词：杜氏肌营养不良症植入前遗传学诊断
- 单细胞二重巢式PCR扩增影响因素初探被引量：1
- 2005年
- 目的 :对影响单细胞二重巢式PCR扩增的因素进行初步探讨。方法 :针对 β 珠蛋白基因CD4 1 4 2、IVS Ⅱ 6 5 4突变位点区域采用二重巢式PCR ,分别以不同的引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液、PCR反应前采用或不采用 98℃预变性扩增单个淋巴细胞和 /或单卵裂球 ,了解这些因素对PCR扩增效率的影响。结果 :不同的引物浓度组中 ,终浓度为 0 .2 5 μmol/LR1+F1引物对与 0 .3μmol/LR2 +F2引物对配对扩增效率最高 ;不同的TaqDNA聚合酶中TaKaRaEXTaq的扩增效率最高 ;中和缓冲液 1(2 0 0mmol/LTricine)的扩增效率显著高于中和缓冲液 2 (90 0mmol/LTris·HCl,pH 8.3/30 0mmol/LKCl/2 0 0mmol/LHCl)的扩增效率 (P <0 .0 5 ) ;单细胞PCR反应前采用 98℃预变性与不采用 98℃预变性的扩增效率间差异无统计学意义。结论 :不同引物浓度组合、不同的TaqDNA聚合酶、不同的中和缓冲液对单细胞的二重巢式PCR的扩增效率存在明显差异 ,而PCR反应前采用 98℃预变性不能提高PCR扩增效率。
- 钟昌高李麓芸陆长富林戈卢光琇
- 关键词：聚合酶链反应植入前诊断Β地中海贫血Β-珠蛋白基因
- 单细胞二重巢式PCR诊断β地中海贫血
- 2006年
- 【目的】探讨单细胞水平诊断β地中海贫血(β-thalassemia)的可靠性,为开展β地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis,PGD)打下基础。【方法】采用二重巢式PCR并结合扩增特异的突变系统检测技术(amplificationrefractorymutationsystem,ARMS)扩增含有CD41-42突变位点的β地中海贫血患者的单淋巴细胞及正常人单淋巴细胞和单卵裂球的β-珠蛋白基因的5个常见突变位点(CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD71-72和nt.-28位点),扩增产物经过2%的琼脂糖凝胶电泳检测。【结果】患者的88个单淋巴细胞的扩增成功率为95.5%,等位基因脱扣的发生率为4.8%,诊断准确率为95.2%;正常人的41个单淋巴细胞的扩增成功率均为95.1%,假阳性率为0;正常人的34个单卵裂球细胞的PCR扩增成功率为88.2%;35管细胞洗脱液空白对照组假阳性扩增率为0。【结论】单细胞二重巢式PCR并结合ARMS技术诊断β地中海贫血是稳定的、可靠的,适用于β地中海贫血的PGD。
- 钟昌高张瞻李麓芸陆长富林戈卢光
- 关键词：聚合酶链反应
- 10个DMD/BMD家系的基因诊断及其中3个家系的产前基因诊断分析被引量：3
- 2006年
- 【目的】对杜氏/贝氏肌营养不良症(DMD/BMD)家系进行基因诊断和产前基因诊断。【方法】抽提DMD家系成员外周血及胎儿羊水或脐静脉血全基因组DNA,采用PCR技术和聚丙稀酰胺凝胶银染法对DMD/BMD基因3'端及基因内的45、50内含子的(CA)n短串联重复序列(STR)多态性进行连锁分析。【结果】结果显示,7个家系可提供遗传连锁诊断信息,完成了其中3个家系的产前基因诊断并出生了一例健康的男性婴儿;3个家系不能提供遗传连锁诊断信息。可诊断率达70%。【结论】STR多态连锁分析适用于常见缺失突变检测未发现缺失的DMD/BMD患者,是一种快速、有效、准确、易于普及的基因诊断方法,能有效地提高DMD/BMD家系基因诊断和产前基因诊断的可诊断率。
- 钟昌高张瞻李麓芸卢光琇
- 关键词：产前诊断
