国家自然科学基金(30901874)
- 作品数：5 被引量：22H指数：1
- 相关作者：舒衡平蒋立平李滨罗玉娇欧阳碧函更多>>
- 相关机构：中南大学中南大学湘雅二医院更多>>
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- 虎纹捕鸟蛛Kunitz型毒素基因的分子改造和表达
- 2016年
- 目的构建HW11c40突变体,寻找合适的表达系统表达HW11c40突变体和HWTX-XI(虎纹捕鸟蛛毒素-XI),解决HWTX-XI来源问题和HW11c40改造后毒素难于获取的难题,为合适HW11c40突变体的筛选和治疗急性胰腺炎高效新药的研制奠定基础。方法用PCR定点突变的方法突变HW11c40相关氨基酸残基,构建HW11c40突变体。HW11c40突变体和HWTX-XI基因经PCR扩增后插入到pET-40b(+)载体,基因5'端插入肠激酶切割位点,再重组到大肠埃希菌BL21(DE3)进行原核周质表达,获得相应的融合蛋白并进行SDS-PAGE鉴定,用镍柱纯化融合蛋白。融合蛋白用肠激酶酶切,释放出的目的蛋白用Tricine-SDS-PAGE进行鉴定,用镍柱分离目的蛋白,进行高效液相色谱进行进一步分离纯化后作质谱鉴定。对HW11c40突变体和HWTX-XI的表达时间、温度和IPTG浓度进行优化。结果成功获得HW11c40的4个突变体,并正确构建HW11c40突变体和HWTX-XI的原核表达载体。经SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE鉴定,重组质粒转化菌在无IPTG诱导的情况下成功表达所有HW11c40突变体和HWTX-XI的融合蛋白,经肠激酶酶切均获得对应的目的蛋白,其中HWTX-XI表达量为3.4mg/L。结论成功构建出HW11c40突变体和HWTX-XI的重组质粒并在原核细胞内高效表达出相应的目的蛋白,开辟了基因工程表达HWTX-XI的新途径,同时解决了HW11c40改造后毒素获取难题,突破了整个系列研究的瓶颈,为突变体的筛选及治疗急性胰腺炎高效新药的研制奠定了基础。
- 罗玉娇舒衡平李滨蒋立平
- 关键词：KUNITZ
- Synthesis and biological characterization of the analogs of Huwentoxin-IV,a neuronal TTX-sensitive sodium channel Inhibitor
- Huwentoxin-Ⅳ(HWTX-Ⅳ) is a polypeptide neurotoxin isolated from the venom of the Chinese tarantula Ornithoctonu...
- Meichun DengXuan LuoLiping JiangHanchun Chen
- 文献传递
- 一种富含半胱氨酸的蜘蛛多肽基因的克隆和初步表达被引量：1
- 2010年
- 目的克隆编码虎纹捕鸟蛛多肽的基因并表达蜘蛛多肽,为研究其生物学功能奠定基础。方法通过构建和随机测序毒腺cDNA文库,克隆编码毒素多肽的基因;构建真核表达质粒,利用酿酒酵母S78株表达系统分泌表达,表达产物进行Tricine SDS-PAGE鉴定。结果克隆到一种编码富含半胱氨酸的多肽的新基因,命名为HWTX-XIVa2基因;构建的真核表达质粒转化酵母S78后表达6.5ku的多肽。结论构建并筛选毒腺cDNA文库是发现毒素多肽基因的一种有效方法,利用基因工程表达是获得蜘蛛多肽的一种有效手段。
- 蒋立平官剑武舒衡平
- 关键词：虎纹捕鸟蛛基因克隆多肽
- 蜘蛛粗毒抗弓形虫作用的初步研究
- 目的:蜘蛛的数量仅次于昆虫,其毒液成分相当复杂,含量丰富的是分子量2-8 KDa的多肽,具有重要的科学研究价值和良好的应用前景。弓形虫对人类健康危害非常严重,目前临床上抗弓形虫药物存在毒副作用大、疗程长、停药易复发等缺点...
- 官剑武唐雅琴李先耀孙洪香章洁蒋立平
- 关键词：弓形虫抗弓形虫作用多肽药物
- 文献传递
- 抗弓形虫药物靶点的研究进展被引量：1
- 2010年
- 刚地弓形虫属于真球虫目弓形虫科,作为一种专性细胞内寄生原虫,几乎可感染包括人类在内的所有哺乳动物、鸟类和爬行类等动物.它是人或动物流产、死胎、弱智儿等同产期疾患病和导致感染者发生眼科疾病及脑神经疾病的病原体;同时,它又是一种机会致病寄生虫,在机体免疫能力低下如艾滋病患者、器官移植及恶性肿瘤患者中,可引起严重的并发症甚至死亡.近年来,随着艾滋病发病率逐年上升和宠物饲养的增多,弓形虫病发病率也随之升高,已成为一个严重的、世界性的公共卫生问题.然而,治疗该病的传统药物如乙胺嘧啶、磺胺类制剂等复发率高、根治率低、疗程长,至今尚未找到理想的治疗药物.随着生命科学技术的发展和应用,人们从分子水平上弓形虫速殖子侵入宿主细胞的分子机制有了越来越深入的认识.人们发现弓形虫是一种对嘌呤、胆固醇和氨基酸等重要代谢物质的专性胞内寄生原虫,其虫体内合成这些营养物质的酶类存在种属特异性,从而为寻找有效的药物作用靶位点成为可能,现就该领域的研究进展概述如下.
- 官剑武舒衡平蒋立平
- 关键词：药物靶点弓形虫速殖子脑神经疾病真球虫目乙胺嘧啶
- 刺毛虫毒刺cDNA文库的构建及初步分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建刺毛虫毒刺的cDNA文库,克隆其毒素编码的基因。方法提取刺毛虫毒刺中的总RNA;使用clontech公司的cDNA文库构建试剂盒进行反转录,长距离PCR方法合成第二条链,酶切纯化后与载体连接,电转化入感受态细胞XL1-Blue,通过抗性筛选后进行菌落PCR鉴定,挑选插入子在300bp以上的单克隆送至测序公司测序。结果成功构建了刺毛虫毒刺cDNA文库,初步鉴定其插入子长度为250～1 000bp。结论刺毛虫毒刺cDNA文库构建成功,并获得大量的编码刺毛虫毒素的全长基因,为研究其致病机制奠定了基础。
- 李滨欧阳碧函徐宏博罗玉娇蒋立平舒衡平
- 关键词：毒素CDNA文库
- Kunitz型胰蛋白酶抑制剂的研究进展被引量：19
- 2012年
- Kunitz型胰蛋白酶抑制剂属于典型丝氨酸蛋白酶抑制剂,其生理功能至少包括了保护储存蛋白、调节内源蛋白酶的活性、保护个体免受昆虫和病原体的侵害、抑制癌细胞侵袭扩散、抗炎、抗真菌等作用。并已经应用到了抗虫性转基因植物和临床疾病治疗中。
- 罗玉娇李滨舒衡平蒋立平
- 关键词：KUNITZ胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶
- 蜘蛛粗毒抗弓形虫作用的初步研究
- 目的:蜘蛛的数量仅次于昆虫,其毒液成分相当复杂,含量丰富的是分子量2-8 KDa的多肽,具有重要的科学研究价值和良好的应用前景。弓形虫对人类健康危害非常严重,目前临床上抗弓形虫药物存在毒副作用大、疗程长、停药易复发等缺点...
- 官剑武唐雅琴李先耀孙洪香章洁蒋立平
- 关键词：弓形虫抗弓形虫作用多肽药物
