公益性行业科研专项(200803015)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：杜鹃华荣虹刘立科宋永陈娜莎更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 日本脑炎病毒囊膜蛋白的基因原核表达及抗原性分析被引量：1
- 2010年
- 参照GenBank中的日本脑炎病毒序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因得到cDNA,克隆至pMD-18T载体,经测序证实后亚克隆至原核表达载体pET-28a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果表明,成功构建了重组质粒pET-28a/JEV E,目的蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot检测表明,表达产物与兔抗JEV多克隆抗体呈阳性反应,在ELISA试验中,用表达出的E蛋白包被,能够很明显地区分出猪日本脑炎阴性、阳性血清。
- 张宁金洪涛夏志平张瑞岩刘雯李勇薛慧亮李丹丁壮
- 关键词：日本脑炎病毒E蛋白原核表达抗原性
- 乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位多肽序列鉴定及分析被引量：3
- 2011年
- 为了对流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白抗原表位E19进行核心序列定位,本研究设计了一系列编码相互部分重叠短肽核苷酸序列,原核融合表达后经westernblot分析,确定其抗原表位核心序列为150ENHGNYS156。该表位在乙型脑炎不同基因型的各种病毒株间为高度保守序列;根据JEVE19表位与同一血清群其他黄病毒之间的差异,在同源序列位置设计了系列突变短肽,融合表达后western blot分析的结果表明,其他黄病毒属病毒同源序列不能与抗JEV阳性血清反应。本实验结果表明JEVE蛋白抗原表位E19具有鉴别检测JEV与西尼罗病毒等其它黄病毒的意义。本实验为进一步研究E蛋白结构和功能以及建立乙型脑炎临床鉴别诊断方法奠定了分子生物学基础。
- 陈娜莎华荣虹闫丽萍赵付荣王斌杜鹃王云峰童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒抗原表位
- 流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立被引量：9
- 2010年
- 为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时间短,灵敏度比常规RT-PCR方法高,可检测出103TCID50/0.2mL JEV;特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病毒均无交叉反应。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测流行性JEV的方法。
- 杜鹃宋永刘立科华荣虹
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒
