中国博士后科学基金(2012T50834)
- 作品数：3 被引量：13H指数：1
- 相关作者：白静徐广贤周林林刘鑫张涛更多>>
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- 发文基金：中国博士后科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究
- 2014年
- 目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。
- 白静范维宁邢译文张涛周林林徐广贤
- miR-638慢病毒载体的构建及其对MAPK14的靶向调控作用被引量：13
- 2014年
- 目的构建miR-638慢病毒过表达载体,探讨其对MAPK14基因的靶向调控作用。方法分别构建pSicoR-miR-638及pMIR-Report-MAPK14过表达载体,应用双荧光素酶报告基因活性、Western blot及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-638与MAPK14的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-638及pMIR-ReportMAPK14重组质粒,并通过实验证实miR-638过表达明能显抑制MAPK14的蛋白及mRNA表达(P<0.05);抑制miR-638的表达,则MAPK14蛋白及mRNA的表达水平明显上调(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-638慢病毒载体,并证实其可通过靶向作用于MAPK14-3’UTR的特异序列而直接抑制MAPK14基因的表达。
- 邢译文刘鑫周林林白静范维宁徐广贤
- 关键词：MICRORNA
- miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用
- 2014年
- 目的构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用。方法基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3'非翻译区(3'UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中。通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3'UTR的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3'UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3'UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达。
- 白静邢译文范维宁郭乐刘鑫郑锡铭徐广贤
- 关键词：MICRORNAS期激酶相关蛋白2
