河北省教育厅自然科学基金(20050131)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：石家庄制药集团有限公司河北省生物研究所河北师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 普通生酮基古龙酸菌S_2基因文库的构建和筛选
- 2008年
- 在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成普通生酮基古龙酸菌S2基因组文库,得到12 000余个转化子.再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清,应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)对文库进行筛选,获得1个阳性克隆K719#.通过检测此基因工程菌的活性,表明在添加辅酶PQQ后,K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达,这为简化Vc的生产工艺奠定了基础.
- 谢莉窦燕峰张铎张丽萍赵宝华
- 关键词：文库筛选
