国家自然科学基金(81302835)
- 作品数：4 被引量：34H指数：4
- 相关作者：马博赵昂张琪姚迪王宇更多>>
- 相关机构：南京工业大学广州中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省临床医学科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯及其生物利用度的研究被引量：6
- 2014年
- 目的采用LC—ESI—MS／MS法同时测定大鼠血浆中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯，并研究这3种活性物质在大鼠体内的药动学特征。方法取100灿血浆样品，用甲基叔丁基醚-二氯甲烷（3：1）萃取，选择右啡烷为内标。采用BDSHypersil C18色谱柱（100mm×2．1mm，2．4μm），乙腈-2mmol·L^-1乙酸铵（含0．05％甲酸）（60：40）为流动相，采用AB Sciex 4000 Q TRAP型三重四级杆串联质谱，ESI源，多反应监测（MRM）正离子模式。经检测，吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和内标的检测离子对分别为：m／z 304．3—134．4、m／z 288．1—273．3、m／z 471．3—425．2、m／z 258．0—201．0。结果血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的线性范围均为0．5～1×10^3 ng·mL^-1（r〉0．9960），提取回收率均〉70％，日内、日间RSD均〈15％。大鼠口服吴茱萸提取物后，血浆中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的Cmax分别为19．02±2．15、19．83±5．83、41．61±7．48ng·L^-1，Tmax分别为1．17±0．29、1．25±0．66、0．63±0．14h，T1／2分别为4．64±2．14、5．72±1．34、4．25±1．72h；绝对生物利用度分别为16．96％±2．80％、12．02％±3．17％、5．43％±1．99％。结论所用方法准确、快速、灵敏，并成功用于临床前的药动学研究。
- 姚迪孙晶晶刘雷顾桂英马博张琪佘金雄
- 关键词：吴茱萸碱吴茱萸次碱吴茱萸内酯绝对生物利用度
- 超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究被引量：8
- 2016年
- 建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱-串联质谱（ultra-fast liquid chromatography-mass spectrometry,UFLC-MS/MS）方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法：取200μL血清样品,采用两步液萃取法,通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析,以雌二醇-d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB-C18色谱柱（2.1mm×50mm,1.8μm）,乙腈-水（含0.1%甲酸）为流动相,梯度洗脱,流速0.20mL/min,柱温40℃,进样量10μL。在电喷雾离子（electrospray ionization,ESI）源正离子模式下,选择多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式。经检测,雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为：m/z为504.0→171.0、m/z为506.0→171.0、m/z为522.0→171.0和m/z为509.0→171.0。结果：丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ESI源下的离子化效率,血清中3种成分的线性范围均为0.01-5.00μg/L,定量下限均达到10ng/L,样品回收率50%以上,批内、批间准确度与精密度均小于15%,满足生物样品的分析要求。结论：该方法灵敏度高、重现性好,可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
- 赵昂张航姚迪唐俊马博
- 关键词：LC-MS/MS雌二醇雌三醇柱前衍生化
- 竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响被引量：12
- 2018年
- 目的研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L^(-1))处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0μmol·L^(-1))干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1))作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达的影响。结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L^(-1)和4.797μmol·L^(-1),且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA1.0,2.0,4.0μmol·L^(-1)浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞内ROS含量均显著增加(P<0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高(P<0.01)。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组的细胞愈合率显著降低(P<0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组均能显著抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P<0.01),均能显著抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P<0.05,P<0.01);RA 0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白相对表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1))能明显抑制HCT-116细胞的迁移�
- 王宇姜修博韩豆朱志铭宋长琴赵昂张琪刘昌辉马博
- 关键词：细胞增殖细胞迁移细胞侵袭
