广东省大学生创新实验项目(1059010021)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：深圳大学更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达被引量：3
- 2011年
- 以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽（GU592793）,推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征：（1）预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;（2）推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;（3）成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide（ACE78290）、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide（ACE78291）以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis（EF）,并在大肠杆菌E.coliOrigami（DE3）中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4 h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在。
- 陈大玮邓利何凡邱聪龄马一见刘志刚
- 关键词：抗菌肽基因克隆原核表达
