国家重点实验室开放基金(JKGP201101)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：王旻张娟何远周雅琼王彤更多>>
- 相关机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 针对EGFR或VEGFR信号通路的相互作用导致的耐药性,为增强抗EGFR或抗VEGFR2抗体单独使用疗效不佳的癌症的治疗效果,本文利用重叠PCR将抗人EGFR胞外区单链抗体基因scFv-E10和抗人VEGFR2(KDR)的单链抗体基因scFv-AK404R融合在一起,得到抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体(bispecific single-chain diabody,scDb)基因,scDb的连接肽序列为15个氨基酸(G4S)3,在肽链的C端引入His标签及myc标签。将scDb基因连接入载体pHEN2,转化大肠杆菌HB2151并诱导表达,经镍柱纯化获得电泳纯scDb蛋白,产量约为570μg.L 1发酵液。ELISA测定显示,scDb与EGFR胞外区的结合与亲本scFv-E10相当,与KDR胞外区的结合略低于亲本scFv-AK404R,表明抗EGFR/抗KDR scDb可与EGFR和KDR两种抗原特异性结合,可用于进一步的抗肿瘤活性研究。
- 周雅琼张娟金海珍何远王彤王旻
- 关键词：表皮生长因子受体血管内皮生长因子受体2双特异性单链抗体单链抗体原核表达
- 抗VEGFR-2全人源IgG1抗体的构建及其在CHO-k细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 本文在实验室构建的单链抗体-Fc融合抗体[scFv(AK404R)-Fc]的基础上构建抗VEGFR-2全人源IgG1样全长抗体(Mab-04)。利用重叠PCR,获得Mab-04的轻链和重链的核酸序列后分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1,获得重组质粒。脂质体法将重组质粒转染至CHO-k细胞,经Protein A柱纯化细胞培养上清液获得目的蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白,ELISA检测Mab-04与抗原亲和力。测序表明重组质粒构建成功,Western blotting检测显示目的蛋白成功表达(1μg·mL-1),ELISA检测阐明该抗体能与抗原结合并呈浓度依赖性(IC50为50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表达并正确装配,为进一步大量制备该抗体及其活性研究打下基础。
- 李致科何远张娟解伟曹婉璐王泽根王旻
- 关键词：VEGFR-2抗肿瘤血管生成
