贵州省卫生厅科学技术基金(gzwkj2011-1-018)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：刘丽娜谭承建贾义张洁钟乃凤更多>>
- 相关机构：贵阳医学院贵州民族大学成都医学院更多>>
- 发文基金：贵州省卫生厅科学技术基金贵州省科技厅科学技术基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌疫苗候选分子StbA主要抗原表位区的表达及重组蛋白抗血清的制备被引量：4
- 2015年
- 通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌能表达出分子质量约为54 000u的重组融合蛋白。表达产物经亲和层析纯化后可获得较高纯度的目的蛋白。Western-blot检测证实该重组蛋白能与乳腺炎患病奶牛恢复期血清发生阳性反应。ELISA结果显示,重组蛋白免疫新西兰大白兔能产生高效价的抗血清,提示StbA主要抗原表位区能刺激机体产生强大的免疫应答,StbA是一个有潜力的保护性抗原候选分子。
- 刘丽娜张洁周静钟乃凤胡祖权贾义谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗血清制备
- 金黄色葡萄球菌疫苗候选分子SirH的B细胞抗原表位预测被引量：1
- 2012年
- 预测金葡菌疫苗候选分子SirH的B细胞抗原表位。用PCR方法从金葡菌临床分离株的基因组DNA中扩增出sirH基因,插入表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达载体pET28a-sirH,双酶切鉴定并测序,通过与GenBank中登录的金葡菌sirH基因序列的比对,获得此临床分离株sirH的核苷酸序列和推导的氨基酸序列。在此基础上,应用生物信息学软件分析SirH蛋白的二级结构柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数等参数。综合各参数预测结果,SirH蛋白N-端第49-57、62-75、83-123、128-162、194-208、242-252、334-350、401-415、452-543、550-564、573-622区段很有可能存在B细胞抗原表位。SirH蛋白B细胞抗原表位的预测,为后续表达SirH主要抗原表位和研究其免疫保护作用奠定了基础。
- 刘丽娜潘渠谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备被引量：1
- 2014年
- 为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。
- 刘丽娜张洁周静胡祖权贾义钟乃凤谭承建
- 关键词：金黄色葡萄球菌抗原表位蛋白表达抗血清制备
