教育部科学技术研究重点项目(204005)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达
- 2006年
- 目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。
- 油红捷毋晓涛潘颖王泽生
- 关键词：RT-PCR基因表达
- 嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究
- 2005年
- 目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。
- 油红捷王泽生
- 关键词：磷酸化修饰
