国家教育部博士点基金(20103221110006)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 相关机构：南京工业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 基于同源建模和定点突变技术研究嗜热型L-阿拉伯糖异构酶与D-半乳糖的亲和作用被引量：3
- 2012年
- 通过同源建模分析选取对Lactobacillus fermentum CGMCC2921来源的L-阿拉伯糖异构酶(简称L-AI酶)催化D-半乳糖生产D-塔格糖起重要作用的氨基酸位点进行突变,发现当Q16,M311,K423和Q438位点的氨基酸突变为丙氨酸时,突变酶Km值降低,其中突变酶M311A降至本体的51.6%,对D-半乳糖的转化率提高了18.7%.当K423位点的氨基酸残基分别突变为丙氨酸、天冬酰胺或精氨酸时,突变酶与底物的亲和力以及D-半乳糖的转化率随着423位点突变氨基酸侧链长度的增加而降低.运用计算机分子模拟技术分析表明,当M311位点氨基酸突变为丙氨酸以后,催化位点氨基酸残基与底物D-半乳糖之间的氢键作用增强,导致与底物亲和力增大,从而提高了酶活力.
- 李贵祥徐铮李莎徐虹
- 关键词：L-阿拉伯糖异构酶D-塔格糖发酵乳杆菌同源建模
- 化学抑制剂Woodward's Reagent K对来源于Erwinia rhapontici NX-5蔗糖异构酶的抑制动力学
- 2014年
- 从重组大肠杆菌E.coli BL21(p ET22b-palⅠ)中纯化得到来源于Erwinia rhapontici NX-5的蔗糖异构酶(sucrose isomerase,SIase,EC 5.4.99.11),以纯酶为对象考察其酶活力抑制动力学。结果表明:SIase纯比酶活1 512.77 U/mg,动力学常数Km=260 mmol/L,Vmax=39.41μmol/(L·s)。以化学抑制剂Woodward's Reagent K(WRK)对重组蔗糖异构酶进行抑制反应,反应体系中随着WRK浓度的升高,SIase与底物蔗糖的亲和力常数Km增大,最大反应速度Vmax在一定范围内保持稳定。通过对SIase的抑制动力学分析可得到,WRK对SIase的抑制类型为可逆的竞争性抑制,这可能与WRK与蔗糖的结构类似,与可竞争性的结合SIase的活性中心有关。
- 王彦媛李莎姚忠徐虹
- 关键词：抑制动力学
- 利用固定化重组大肠杆菌细胞生产D-塔格糖被引量：4
- 2011年
- 利用经海藻酸钙包埋的重组大肠杆菌细胞催化D-半乳糖生产D-塔格糖,考察了细胞包埋量、反应条件对固定化细胞催化效率以及对D-塔格糖生产稳定性的影响。确定的最优转化条件为:温度65℃,pH 6.5,添加终浓度为1 mmol/L Mn2+,底物(D-半乳糖)浓度100 g/L,重组大肠杆菌细胞用量40 g/L。固定化小球在0.3%戊二醛溶液中交联30 min可以显著提高其在高温下的机械强度。考察了异构化反应体系中硼酸与底物间的摩尔比对产率的影响。研究结果表明,添加适量的硼酸可以改变原有的化学反应平衡,实现D-塔格糖的高产。利用D-半乳糖为底物在最优的反应条件下催化24 h,固定化细胞对D-半乳糖的转化率最高,可达65.8%,连续转化8批次的平均转化率为60.6%,为工业化生产D-塔格糖奠定了基础。
- 付凤根徐铮李贵祥李莎冯小海徐虹
- 关键词：D-塔格糖固定化细胞重组大肠杆菌硼酸L-阿拉伯糖异构酶
- L-核糖的生产研究进展被引量：6
- 2013年
- L-核糖是合成许多抗病毒药物的关键中间体,自然界和生物体中并不存在。L-核糖的制备方法有化学合成法和生物合成法。与化学合成法相比,生物合成法对环境更加有利。生物合成法是应用微生物及其酶以核糖醇或L-阿拉伯糖为原料生产L-核糖。综述了L-核糖的制备方法以及产品的分离纯化技术,并对L-核糖的研究现状和前景进行了展望。
- 詹伊婧徐铮许露李莎徐虹
- 关键词：生物催化L-阿拉伯糖异构酶
- 生物法生产D-塔格糖的研究进展被引量：5
- 2013年
- D-塔格糖具有多种独特的生理特性与功能,近年来已被发达国家开发作为具有高经济附加值的功能性甜味剂进行销售。D-塔格糖的商业化生产长期以来依赖化学催化法,随着20世纪90年代利用L-阿拉伯糖异构酶(简称L-AI酶)催化D-半乳糖制备D-塔格糖技术的兴起,生物法生产D-塔格糖成为了新的发展趋势。结合笔者所在课题组近年来的研究成果,就D-塔格糖生物法生产工艺的研究现状和前景进行综述与展望。
- 徐铮李贵祥李莎徐虹
- 关键词：D-塔格糖功能性甜味剂L-阿拉伯糖异构酶
