国家自然科学基金(30471496)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后APOBEC3G mRNA水平的监测
- 2009年
- 目的:观察人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后,在其细胞内APOBEC3G蛋白水平降低的同时,APOBEC3GmRNA的水平是否也下降,阐明HIV-1抵抗APOBEC3G蛋白抗病毒作用的机制。方法:H9细胞感染HIV-1后,在不同时间点收集细胞和培养上清,提取细胞总RNA,应用实时定量PCR检测APOBEC3G mRNA的水平。检测上清液的HIV-1 p24抗原含量验证H9细胞是否感染了HIV-1。结果:(1)采用??CT相对定量PCR方法检测APOBEC3G mRNA水平,其准确性高于94%。(2)在体外水平,H9细胞在感染HIV后,APOBEC3G mRNA水平没有显著变化(P>0.05)。结论:HIV-1可能主要通过降低APOBEC3G蛋白的水平而抵抗其抗病毒作用,这比通过降低mRNA水平来抵抗APOBEC3G的抗病毒作用更为快速、有效。
- 刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云
- 关键词：HIV-1APOBEC3GMRNA水平
- 我国HIV-1 B'亚型流行株vif基因序列特征及变异分析被引量：2
- 2006年
- 目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩增阳性的29例PCR产物进行vif区基因的测序及分析。结果29条vif基因的平均离散率是0．0328,突变主要集中于90～120、270 -302、372～405、450～470四个区域。Vif多肽链的90～93位和157～160位存在两个富含R和K带有强烈正电荷的亲水区,带正电荷的R或K交替出现,几乎没有其他的氨基酸残基。29个Vif多肽链有21条在90～93位存在R90 RKR93基序;有26条在157-160位存在K157 RRK160基序,29条序列在114位和133位存在两个在HIV-1和HIV-2以及SIV内保守的半胱氨酸(A)。结论vif在HIV-1基因组内具有相对保守性,其特征性区域和氨基酸基序对于保持Vif蛋白的功能是十分重要的。
- 李林刘永健鲍作义李韩平庄道民刘思扬李敬云
- 关键词：人免疫缺陷病毒
- APOBEC3G蛋白的原核表达及纯化
- 2008年
- 目的:原核表达重组APOBEC3G蛋白,为其功能及免疫原性研究奠定基础。方法:提取H9细胞全细胞基因组RNA,通过RT-PCR获得目的基因,经纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得表达工程菌株,并对表达条件和纯化条件进行优化;利用WesternBlot分析鉴定目的蛋白。结果:构建了APOBEC3G蛋白的原核表达载体Apo-His-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性蛋白形式存在;经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化,获得了高纯度的重组APOBEC3G蛋白,蛋白浓度可达1.2mg/mL;WesternBlot显示获得了目的蛋白。结论:在原核表达系统中表达、纯化了可溶性APOBEC3G蛋白,为进一步对其进行免疫原性和功能研究奠定了基础。
- 隋洪帅李林鲍作义李敬云
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 艾滋病病毒长期不进展者、缓慢进展者、高危暴露者以及正常人群APOBEC3G mRNA水平的差异被引量：3
- 2008年
- 目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外逆转录为eDNA，应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测不同人群血标本APOBEC3GmRNA的水平。结果HIV长期不进展者标本13份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（716±169）个／弘1，平均感染时间为（12．5±2．3）年；HIV缓慢进展者标本48份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（233±144）个／μ1，平均感染时间为（10．7±2．2）年。HIV长期不进展者APOBEc3GmRNA水平高于正常人群的水平；HIV缓慢进展者APOBEC3GmRNA水平高于高危人群和正常人群的水平。HIV长期不进展者和缓慢进展者的CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。结论我国中部地区HIV流行区4类不同人群APOBEC3GmRNA水平存在差异，并且HIV长期不进展者和缓慢进展者CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。
- 刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云
- 关键词：艾滋病病毒MRNA水平
