国家自然科学基金(30471498)
- 作品数：16 被引量：62H指数：5
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- 氟对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1表达的影响被引量：16
- 2006年
- 目的观察不同剂量氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞核心结合因子α1(cbfa1)表达的影响。方法采用细胞培养的方法,将细胞分为对照组和6个染氟组(0．1、1．0、100．0、1000．0、10 000．0、20 000．0μg／L),分别在5个染氟时间段(2、4、24、48、72 h)收集培养细胞培养上清液和细胞,应用酶联免疫吸附(ELISA)法和免疫组化方法检测cbfa1蛋白含量和表达,应用RT-PCR方法检测染氟48 h cbfa1 mRNA的表达。结果①与对照组比较(2．13±0．07),成纤维细胞染氟48 h时,cbfa1蛋白含量在0．1、1．0、100．0、1 000．0、20 000．0μg／L组[(2.35±0．08)、(2．28±0．09)、(2．32±0．09)、(2．25±0．08)、(2．28±0．09)]及染氟72 h的10 000．0μg／L组(2．48±0．22)明显升高;染氟48 h,cbfa1 mRNA表达呈升高趋势,其中10 000．0μg／L组(1．29±0．30)与对照组(1．02±0．12)比较,明显增强;免疫组化结果显示,染氟48 h的0．1μg／L组成纤维细胞内可见明显cbfa1阳性表达。②在成骨细胞,染氟组cbfa1蛋白含量较对照组有不同程度增加;染氟48 h时,0．1、1．0、100．0、1 000．0μg／L组cbfa1 mRNA表达较对照组(1．27±0．20)升高,其中0．1μgL组(1．34±0．19)明显升高。结论氟能提高成纤维细胞和成骨细胞cbfa1蛋白含量,促进cbfa1和cbfa1 mRNA表达,成纤维细胞可能在氟骨症骨周化骨的发生中起重要作用。
- 井玲剂玲李彤李广生
- 关键词：氟化物成纤维细胞成骨细胞核心结合因子Α1细胞培养
- 氟对小鼠成纤维细胞血管内皮生长因子表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察氟在单层细胞培养系统即二维（2D）培养体系和成纤维细胞（FB）胶原凝胶系统即三维（3D）培养体系中对小鼠FB血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨VEGF表达改变对FB成骨功能的作用。方法在2D、3D培养体系中，FB按染氟剂量不同分为0（对照）、0．0001、0．0010、0．1000、1．0000、10．0000、20．0000mg／L组，染氟培养48h后，应用RT—PCR法、酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法（IHC）检测VEGF mRNA和蛋白的表达。结果3D培养体系中，0．1000mg／L组VEGF mRNA表达（1．08±0．09）高于对照组（0．93±0．02，P〈0．05）。2D培养体系中，0．1000、1．0000、10．0000mg／L组VEGF蛋白表达（0．19±0．02、0．26±0．01、0．32±0．01）高于对照组（0．14±0．01，P均〈0．05）；3D培养体系中，0．1000、1．0000ms／L组VEGF蛋白表达（0．59±0．06、0．52±0．03）高于对照组（0．37±0．05，P均〈0．01）。2D培养体系中，0．0010mg／L组VEGF蛋白阳性表达细胞数（0．45±0．05）高于对照组（0．36±0．03，P〈0．05）；3D培养体系中，0．0010、0．1000、1．0000mg／L组VEGF蛋白阳性表达细胞数（0．62±0．04、0．70±0．06、0．65±0．07）高于对照组（0．44±0．04，P〈0．05或〈0．01）。结论2D和3D培养体系中FBVEGF mRNA和蛋白，提示VEGF在氟化物刺激FB成骨功能增强方面具有重要作用。
- 齐玲陈春红刘辉赵志涛井玲
- 关键词：氟化物成纤维细胞血管内皮生长因子类
- 氟对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达的影响被引量：9
- 2006年
- 目的研究不同剂量的氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Ⅰ型胶原表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,给予不同剂量的氟,提取RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅰ型胶原mRNA:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测培养液上清中的Ⅰ型胶原蛋白质。结果与对照组相比,1、2及4 mg／L F-均能促进Ⅰ型胶原表达,但在蛋白质表达方面培养48 h后只有2、4 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．05),而在培养72 h后各加氟组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P< 0．01);在mRNA表达方面培养48 h后只有2 mg／L F-组与正常对照组差异有统计学意义(P<0．01),而在培养 72 h后2 mg／L F-和4 mg／L F-组与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0．01)。结论氟可促进成骨细胞Ⅰ型胶原的表达,且与氟化物水平以及作用时间有关。
- 李丹李艳辉范哲李广生
- 关键词：氟化钠成骨细胞逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定
- 氟对三维培养中成纤维细胞增殖活性的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨不同浓度氟在不同时间段对三维培养体系中成纤维细胞增殖活性的影响。方法应用鼠尾胶原制备三维培养支架,种植小鼠皮肤成纤维细胞株(L929)。将细胞分为对照组和6个染氟组(0.001、0.002、0.1、1、10和20mg/LF-),采用四唑盐(MTT)比色法,检测氟化物作用1、2、4、24、48、72和96h对成纤维细胞细胞增殖特性的作用。结果成纤维细胞在加氟初期仅个别组(1h和2h的0.002mg/L组和2h的0.1mg/L)细胞增殖活性有增加,其他组下降或明显下降;加氟24、48和72h时间段各加氟组成纤维细胞细胞增殖活力多高于未加氟组,未达统计学差异显著程度。结论氟对三维培养中的成纤维细胞的增殖活力有刺激作用,但作用发生较慢,程度相对较弱。
- 齐玲刘辉陈春红魏海峰井玲
- 关键词：氟化物成纤维细胞
- 氟对成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和成骨结节形成的影响被引量：11
- 2007年
- 目的 研究氟化物对成纤维细胞Ⅰ型胶原表达和成骨结节形成的影响。方法 将成纤维细胞分为对照组和6个加氟组，氟质量浓度分别为0．0001、0．0010、0．1000、1．0000、10．0000、20．0000mg／L。应用RT—PCR法和ELISA法检测各组成纤维细胞Ⅰ型胶原tuRNA和蛋白的表达。同时应用茜素红染色法观察矿化诱导液对成纤维细胞成骨结节形成的作用。结果 染氟2h的0．0001、0．0010、0．1000mg／L组，染氟4h的0．1000mg／L组．染氟24h的1．0000、10．0000、20．0000mg／L组及染氟72h的10．0000、20．0000mg／L组成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平明显升高：染氟48h成纤维细胞Ⅰ型胶原tuRNA的表达增强趋势明显。染氟10d，受矿化诱导液诱导的成纤维细胞出现集中现象。并形成较多数量、大小不等的成骨结节，有明显的钙盐沉积。结论 氟化物可明显促进成纤维细胞成骨表型表达和成骨活动增强。
- 井玲齐玲徐辉李广生
- 关键词：氟化物成纤维细胞成骨细胞
- 氟对大鼠成骨细胞Runx2表达的影响被引量：10
- 2008年
- 目的研究氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Runx2表达的影响。方法体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞，按染氟剂量分为0（对照组）、1、2、4mg／L4个水平，分别在48、72h后，提取RNA，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测Runx2 mRNA表达；采用酶联免疫吸附试验（EUSA）方法检测培养液上清中的Runx2蛋白质。结果Wistar大鼠乳鼠成骨细胞在体外染氟培养48h后，1、2、4mg／L染氟水平下Runx2的mRNA表达（0．613±0．055、0．773±0．070、0．775±0．070）与对照组（0．482±0．043）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；在染氟培养72h后，1、2、4mg／L染氟水平和对照组的Runx2 mRNA表达量分别为0．969±0．048、1．229±0．061、1．255±0．063、0．724±0．036，任意两组间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。各染氟组Runx2 mRNA表达，72h组均高于48h组（P〈0．05）；染氟剂量和染氟时间有交互作用（F=189．20，P〈0．05）。在染氟培养48h后，1、2、4mg／L染氟水平下的Runx2蛋白质表达（0．141±0．007、0．143±0．008、0．143±0．011）与对照组（0．129±0．012）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；在染氟培养72h后，1、2、4mg／L染氟水平下的Runx2蛋白质表达（0．156±0．014、0．168±0．018、0．162±0．010）与对照组（0．137±0．016）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；各染氟剂量Runx2蛋白质表达，72h组均高于48h组（P〈0．05），染氟剂量和染氟时间之间无交互作用（F=2．22，P〉0．05）。结论氟可促进成骨细胞Runx2的mRNA和蛋白质表达，与染氟的剂量以及作用时间有关。
- 李丹王育珊李艳辉范哲井玲李广生
- 关键词：RUNX2氟化钠成骨细胞逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定
- 染氟成纤维细胞内Ca^(2+)水平的变化及其意义被引量：4
- 2007年
- 目的研究氟对成纤维细胞Ca2+浓度的影响并探讨其意义。方法应用扫描共聚焦显微技术测定不同染氟条件下(0.0001、1、10mg/LF-)成纤维细胞Ca2+水平的变化。结果染氟1mg/L组成纤维细胞在染氟500s左右时[Ca2+]i水平开始升高,约1500s达到高峰,然后开始下降,3000s左右回到起点位置。结论成纤维细胞染氟1mg/LF-组[Ca2+]i有一过性升高。认为这种[Ca2+]i浓度的变化在影响成纤维细胞中cbfa1和某些生长因子之间的相互关系、促进细胞增殖、分化及成骨表型转换中可能起重要作用。
- 井玲齐玲赵志涛李广生
- 关键词：氟化物细胞内钙成骨表型
- 染氟成纤维细胞超微结构和细胞周期的改变及其意义被引量：4
- 2006年
- 目的研究氟化物对成纤维细胞超微结构和细胞周期方面的影响。方法将成纤维细胞分为不同氟剂量组(0、0.000 1、0.001、0.01、0.1、1、10和20 mg/L),染氟48 h。应用透射电镜和流式细胞术分别观察成纤维细胞的超微结构改变和细胞周期变化。结果染氟成纤维细胞内粗面内质网明显扩张,高尔基体、脂滴和糖原增多,未见细胞毒性颗粒;染氟0.1 mg F-/L组G0-G1期细胞百分率低于未染氟组(分别为48.8%和54.0%);染氟组S期细胞百分率高于未染氟组(未染氟组为31.7%,染氟0.000 1、0.001、0.1、1、10和20 mg F-/L组则分别为32.4%、46.1%、32.4%、35.1%和33.7%);同时发现染氟组成纤维细胞凋亡数较未染氟组减少(未染氟组凋亡细胞数为3.1%,染氟0.000 1、0.001、0.1、1、10和20 mg F-/L组分别为2.6%、2.5%、1.3%、0.8%、0.5%和1.9%)。结论染氟可明显刺激成纤维细胞增殖、合成和分泌功能,并降低细胞凋亡百分率。
- 井玲徐辉齐玲李广生
- 关键词：氟化物成纤维细胞超微结构细胞周期流式细胞术
- 氟对二维和三维培养的成纤维细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响
- 2010年
- 目的观察不同浓度氟化物在不同时间段对二维(2D)和三维(3D)培养的成纤维细胞胰岛素样生成因子-1(IGF-1)表达的影响,并探讨其在氟化物刺激成纤维细胞成骨功能方面的作用。方法在2D和3D培养系统中,将成纤维细胞L929分为对照组(F-浓度为0mg/L)和6个染氟组(F-浓度分别为0.0001、0.001、0.1、1、10和20mg/L),在不同染氟时间段(2D培养2、4、24、48和72h,3D培养4、24、48、72和96h),采用ELISA法检测细胞培养上清中IGF-1蛋白的含量;免疫组化法(IHC)检测染氟成纤维细胞中IGF-1的表达;RT-PCR法检测染氟成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平。结果染氟可明显刺激成纤维细胞培养上清中IGF-1蛋白的表达;各染氟组成纤维细胞胞浆IGF-1的阳性着色较对照组均明显增强;氟作用48h,除F-浓度为20mg/L组外,其余各染氟组成纤维细胞IGF-1基因mRNA的转录水平较对照组均有不同程度的增强,但差异均无统计学意义。结论在2D和3D两种培养条件下,氟化物均可明显刺激成纤维细胞IGF-1的表达,提示在氟化物诱导成纤维细胞成骨功能增强的过程中,IGF-1可能发挥着重要作用。
- 魏海峰井玲魏雁虹刘辉齐玲赵志涛张秀云李才
- 关键词：氟化物成纤维细胞胰岛素样生长因子-1氟骨症三维细胞培养
- 氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF-β和Smad2/3表达的影响被引量：2
- 2006年
- 目的：观察不同浓度氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞中转化生长因子β（TGF-β）和Smad2／3表达的影响。方法：将成纤维细胞和成骨细胞各分7个染氟组（0、0．0001、0．001、0．1、1、10和20mg·L^-1），在5个染氟时间段（2、4、24、48和72h）采集细胞培养上清，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF—β和Smad2／3含量，应用RT—PCR方法检测染氟48h细胞TGF-β mRNA的表达。结果：与染氟0mg·L^-1组比较，氟作用2h的0．001、0．1、1、10和20mg·L^-1组和氟作用4h的0．0001、0．001、0．1、10和20mg·L^-1组成纤维细胞TGF—β蛋白表达明显降低（P〈0．01或P〈0．05）；染氟48h时1和20mg·L^-1组成纤维细胞TGF—β mRNA表达有所增强，染氟2～24h时Smad2／3表达多呈上升趋势，但差异无显著性（P〉0．05）；成骨细胞染氟48h时0．0001、0．001和1mg·L^-1组TGF—β蛋白表达增强（P〈0．01或P〈0．05），TGF-β mRNA的表达呈增强趋势；染氟成骨细胞Smad2／3表达多呈上升趋势，其中染氟48h的20mg·L^-1组表达明显升高（P〈0．01）。结论：染氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF—β表达具有不同的作用特点，TGF—β在成纤维细胞成骨表型转换过程中可能起重要作用。
- 赵轶卓齐玲徐辉井玲
- 关键词：转化生长因子成纤维细胞成骨细胞酶联免疫吸附测定逆转录聚合酶链反应
