四川省重点科技攻关项目(01NG018-01)
- 作品数：3 被引量：24H指数：2
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- 相关机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：四川省重点科技攻关项目四川省重点科学建设项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用被引量：21
- 2006年
- 进行了几种主要禽疫病诊断基因芯片制备及其初步应用研究。试验分别设计和克隆鉴定了NDV、IBV、AIV和IBDV的靶基因重组质粒。以克隆的靶基因重组质粒为模板,分别进行PCR扩增制备靶基因并纯化,以基因芯片点样仪将制备的靶基因点制在氨基化的基片上,经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后,成功制备了NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片。试验应用CY3荧光标记制备的探针进行芯片的检验,结果表明制备的NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片质量好,可对NDVI、BV、AIV和IBDV进行诊断检测,具有检测灵敏性好,特异性高和芯片可重复检测的优点。试验对30个临床样品进行初步应用检测,结果表明该诊断基因芯片技术与RT-PCR检测技术检出率基本一致,并具有同步诊断检测多种疫病的优点。
- 曹三杰文心田肖驰张焕容杨利肖国生黄小波
- 关键词：鸡新城疫鸡传染性支气管炎禽流感鸡传染性法氏囊病基因芯片
- PRRSV C14-2分离株N基因的克隆与原核表达
- 通过RT-PCR特异性扩增出PRRSV C14-2分离株的N基因全序列,并进行了pUCm-T载体克隆,构建了 pET-32a-N原核表达载体。重组菌pUCmT-N的PCR鉴定均获得了大小约380bp的DNA条带。质粒pU...
- 王永志曹三杰文心田肖弛周婷钱洪喜
- 关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒抗原性
- 文献传递
- 猪细小病毒SR-1株编码基因及5’末端的克隆及序列测定
- 参照Genbank收录的猪细小病毒基因组序列,设计合成4对引物,利用其中3对引物分3段扩增及克隆了PPV SR-1株全部编码基因．利用设计的特异性引物配合9mer随机引物扩增及克隆了SR-1株非保守的5’末端序列．将上述...
- 张宇文心田曹三杰
- 关键词：猪细小病毒编码基因克隆测序
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒N基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2008年
- 应用RT-PCR扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因,将扩增的N基因克隆到pMD18-T载体中,进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切鉴定,将获得的N基因片段以pET32a(+)载体进行亚克隆,构建了pET32-N重组表达质粒并进行鉴定。将pET32-N重组质粒转化BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,并对表达条件进行了选择,对表达产物进行了定位和纯化。结果表明,N基因全长1149 bp,编码382个氨基酸,克隆的N基因包含完整的阅读框且能在大肠杆菌中正确表达,表达的最佳IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L,最佳诱导时间为3 h,表达的N蛋白约为47 000,主要以包涵体形式存在于细胞质中。
- 黄小波曹三杰文心田肖国生肖驰
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒N基因克隆纯化
- PRRSV C14-2分离株N基因的克隆与原核表达
- 通过RT-PCR特异性扩增出PRRSV C14-2分离株的N基因全序列,并进行了pUCm-T载体克隆, 构建了pET-32a-N原核表达载体．重组菌pUCmT-N的PCR鉴定均获得了大小约380bp的DNA条带．质粒pU...
- 王永志曹三杰文心田肖弛周婷钱洪喜
- 关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒抗原性
- 文献传递
- 猪2型圆环病毒ORF2基因片段的克隆与序列分析
- 2006年
- 利用ArrayDesigner2.0软件设计PCV2引物直接从PDNS病料肺组织中PCR扩增获得PCVCQB7基因片段,用pMD18-T载体连接、克隆获得PCVCQB7重组质粒。序列测定和与标准毒株对位比对分析PCVCQB7核苷酸序列全长624bp,系PCV2ORF2基因片段,与PCV2分离株的核苷酸序列相似性在80%以上,与PCV1在66%以下,采用最大似然法构建的系统发生树分析发现PCVCQB7位于PCV2主枝上,并与国内和欧洲分离株Imp.1147、304、375、QD、GD-TS、SH、24657_NL毒株亲缘关系较近形成一小分枝,表明PCVCQB7为引起PDNS的PCV2扩增产物。
- 曹三杰肖驰文心田马晓平
- 关键词：猪2型圆环病毒基因克隆
