广东省自然科学基金(013072)
- 作品数：52 被引量：166H指数：7
- 相关作者：黄宗海俞金龙厉周苏国强李强更多>>
- 相关机构：南方医科大学中国人民解放军第一军医大学广州军区广州总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划深圳市科技计划项目更多>>
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- TNP-470对大鼠血管平滑肌细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响
- 2002年
- 目的研究TNP-470对血管平滑肌细胞生长的影响。方法采用MTT法检测TNP-470对体外培养的SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测TNP-470对细胞周期分布及其相关蛋白CDK4、CyclinD1和p27表达的影响。结果TNP-470对血管平滑肌细胞生长具有抑制作用,IC50约为23.3μg/L。TNP-470处理组细胞S期比率[(15.43±5.16)%]和G2/M期比率[(9.49±2.70)%]明显低于对照组[(22.29±6.80)%、(16.51±8.61)%,P<0.05,P<0.05];而G0/G1期则相反,G0/G1期比率[(75.14±6.62)%]显著高于对照组[(60.38±7.23)%,P<0.001];处理组PI(23.76±7.92)明显小于对照组(39.62±7.23,P<0.001)。TNP-470处理组CyclinD1蛋白(27.93±4.22)和CDK4蛋白(51.80±6.65)表达明显低于对照组(32.13±3.28、59.65±7.34,P<0.05、P<0.05);但p27蛋白(51.27±3.75)表达较对照组(39.62±7.23)显著增多(P<0.001)。结论TNP-470通过细胞周期阻滞作用抑制血管平滑肌细胞的生长,该抑制作用与TNP-470影响VSMCs中CyclinD1、CDK4和p27蛋白的表达有关。
- 范应方黄宗海聂晶
- 关键词：TNP-470细胞周期血管平滑肌细胞
- KDR-CDglyTK融合基因系统对结肠癌细胞增值的影响
- 2009年
- 目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人结肠癌细胞SW620增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SW620细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SW620细胞生长增值的影响。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW620和LS174T细胞中有GFP表达。已转染腺病毒的SW620和LS174T细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05)。在前药应用下,已转染腺病毒的SW620和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW620细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01)。融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01)。结论KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人结肠癌SW620细胞,抑制其增值。
- 刘跃东汪森明黄宗海李强
- 关键词：KDR启动子5-氟胞嘧啶
- 双自杀基因系统对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用被引量：1
- 2007年
- 目的:研究腺病毒介导的VEGF启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用。方法:重组腺病毒载体体外感染表达VEGF的Capan-2细胞株,观察其感染效率,并以RT-PCR方法检测转基因细胞内CDTK的表达;然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2细胞增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期和DNA含量的变化;建立小鼠Capan-2细胞动物模型,计算抑瘤率。结果:两种腺病毒对Capan-2的感染率相似,其感染率随腺病毒效价的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2细胞生长,且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2细胞有凋亡改变;流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰,细胞周期分析显示治疗后细胞G0/G1期比率增多,G2/M及S期细胞减少。体内裸鼠移植瘤模型的建立成功,实验组肿瘤体积缩小。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,并诱导细胞凋亡,可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。
- 孔恒黄宗海于洪波韩新军闫振宇陈旭
- 关键词：胰腺肿瘤异种移植模型抗肿瘤试验
- KDR启动子驱动的双自杀基因对实体瘤细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用被引量：5
- 2005年
- 目的腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDRCDglyTK)体系对实体肿瘤细胞及血管内皮细胞靶向杀伤作用。方法分别将KDR和CMV启动子融合基因腺病毒体外感染表达KDR的ECV304、MCF7、MGC803及SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5FC和/或GCV,观察其对各细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种腺病毒对各细胞的感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,各细胞株均达约100%感染;感染AdCMVCDglyTK的各组细胞和感染AdKDRCDglyTK的ECV304、MCF7、MGC803及SW620对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无统计学意义(P均>0.05);与其他细胞相比,感染AdKDRCDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01);且观察到该体系明显的旁观者效应。结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤实体肿瘤细胞及血管内皮细胞。
- 苏国强黄宗海苏刚俞金龙厉周范应方周广军林荣凯陈建雄
- 关键词：KDR启动子双自杀基因实体瘤细胞血管内皮细胞靶向杀伤
- 新法制备含VEGF启动子驱动的CD/TK融合基因重组腺病毒被引量：5
- 2004年
- 目的 应用简化的细菌内同源重组法高效制备含血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。方法 先以氯化钙法替代电穿孔法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌，制备BJ5183pAdEasy-1细菌；再以后者作感受态细菌，与线性化的转移质粒pAdtrack-VEGFP-CDglyTK进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CDglyTK，转染293细胞，制备含VEGF启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。结果 构建重组腺病毒质粒的成功率为60％(6／10)。转染293细胞后7～12d可收获病毒。结论 简化的细菌内同源重组法简便易行，重组效率较高，易于推广应用。
- 黄元媛黄宗海陈建发汤福祥杨文宇郑全车小燕
- 关键词：VEGF启动子重组腺病毒血管内皮细胞生长因子基因治疗
- TNP-470对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2003年
- 目的研究TNP-470对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将16只人结肠癌皮下移植瘤裸鼠随机分成实验组和对照组,实验组隔日予以TNP-47030mg/kg,皮下注射,对照组予以相同体积的生理盐水,4周后处死,应用免疫组织化学法(免疫组化)和图象分析技术检测肿瘤细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡,透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果TNP-470明显抑制了肿瘤的生长,抑瘤率为45.53%。实验组肿瘤中PCNA的表达显著低于对照组,凋亡指数上升,电镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化。结论TNP-470除了通过抗血管生成作用抑制肿瘤生长外,还可通过抑制LOVO细胞本身的增殖和诱导凋亡发挥抗肿瘤作用。
- 黄宗海范应方吴爱国
- 关键词：TNP-470LOVO细胞增殖细胞核抗原血管生成抑制剂
- AdKDR-CDglyTK系统对结直肠癌细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用被引量：3
- 2005年
- 目的研究腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子受体(KDR)启动子驱动CD/TK双自杀基因系统对血管内皮细胞及结直肠癌肿瘤细胞的选择性杀伤作用。方法质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK和pAdEasy-CMV-CDglyTK在293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV304、SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-氟胞嘧啶(5-FC)及更昔洛韦(GCV)处理,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种病毒滴度均为2.0×1012pfu/ml。两种重组体对各细胞株的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR方法检测发现:除感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞外,感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞及感染AdKDR-CDglyTK的其他两种细胞均有目的基因CDglyTK的表达。该体系治疗结果提示:(1)感染AdCMV-CDglyTK的所有细胞株和感染AdKDR-CDglyTK的ECV304、SW620细胞对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无显著性意义(均P>0.05),与前两者相比感染AdKDR-CDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(均P<0.001);(2)双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因的疗效(均P<0.001);(3)该体系旁观者效应明显。结论KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的血管?
- 黄宗海苏国强杨祖立俞金龙厉周范应方宋慧娟
- 关键词：KDR结直肠癌双自杀基因重组体
- AdKDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌MGC-803细胞体的外杀伤作用被引量：1
- 2006年
- 目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子第二受体,亦即酪氨酸激酶受体(kinase domain-containing receptor,KDR) 启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人胃癌细胞株MGC-803的杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK 在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MGC-803细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和／或更昔洛韦,观察该体系对MGC-803细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果所得病毒滴度为2．0×1012pfu／ml。MGC-803细胞株感染率随腺病毒滴度的递增而增加。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0．001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制MGC-803细胞DNA的合成,表现为G1期细胞比率增多及S期细胞减少(P<0．001)。同时,电镜下可见MGC-803细胞有凋亡和坏死改变。结论腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因体系可以有效地杀伤人胃癌细胞。
- 周广军黄宗海俞金龙厉周苏国强
- 关键词：KDR启动子自杀基因治疗
- 应用两步氯化钙转化法高效制备双自杀基因重组腺病毒被引量：3
- 2003年
- 目的构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动下的双自杀基因重组腺病毒。方法应用PCR扩增出CD和TK基因,经适当改造后插入pAdtrack CMV中构建成转移质粒pAdtrack CMV-CDTK,经酶切线性化后,转化用氯化钙制备的感受态AdEasier-1细菌,获得重组腺病毒质粒。最后将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒,滴度测定后,体外感染血管内皮细胞ECV304。结果PCR检测表明已成功构建了含CD、TK融合基因的重组腺病毒,为进一步开展肿瘤的双自杀基因治疗研究奠定了基础。结论应用改进后的AdEasy系统构建腺病毒相比于传统AdEasy系统,方法更简便、成功率更高、实验周期更短。
- 郑权黄宗海汤福祥黄媛媛车小燕
- 关键词：基因治疗
- 重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05)。在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0.01)。融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01)。结论KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值。
- 李强黄宗海俞金龙苏国强厉周
- 关键词：KDR启动子自杀基因治疗腺病毒
