江苏省自然科学基金(BK2002145)
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
- 相关作者：高宜录刘梅林社裕高树梓李传友更多>>
- 相关机构：南通大学江苏省神经再生研究重点实验室如皋市人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠星形胶质细胞与C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析被引量：3
- 2007年
- 目的探讨星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化。方法选择星形细胞来源的 C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析。星形细胞和 C6细胞双向凝胶电泳(2-DE)的凝胶图像用 PDQuest 软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证。结果获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽 S-转移酶 P、钙网织蛋白和膜联蛋白 A2在 C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白γ-肌动蛋白在 C6细胞中表达量较低。磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白 A2和波形蛋白经半定量RT-PCR 验证与2-DE 结果相符。结论本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关。
- 高宜录刘鹏孙华林刘梅
- 关键词：蛋白组学星形细胞瘤
- C6细胞中诱导体外培养大鼠神经干细胞迁移蛋白的初步分析
- 2007年
- 目的:许多体内实验表明神经干细胞具有向胶质瘤细胞迁移的特性,该特性使神经干细胞有可能成为基因治疗脑胶质瘤潜在的基因携带者。实验拟观察大鼠星形胶质瘤C6细胞诱导体外培养的大鼠神经干细胞的迁移作用,并初步分离C6细胞中诱导神经干细胞迁移的蛋白。方法:实验于2005-01/2006-05在南通大学江苏省神经再生重点实验室完成。实验材料:C6细胞用含10%小牛血清的DMEM/F12培养基进行培养,使用时细胞处于对数生长期。清洁级的新生1周内的SD大鼠由南通大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。实验方法:从新生5～7dSD大鼠大脑皮质分离培养、纯化神经干细胞。从SD新生红皮鼠大脑皮质分离、培养、纯化星形胶质细胞。采用"TranswellInserts"细胞培养室培养系统共培养36h,比较C6细胞和大鼠星形胶质细胞对体外培养的大鼠神经干细胞的迁移作用;自然系统聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分离C6细胞和星形胶质细胞差异蛋白,观察各蛋白凝胶条带对神经干细胞的迁移作用。结果:体外培养C6细胞能诱导神经干细胞迁移,迁移细胞数目与星形胶质细胞相比,差异有显著意义(P<0.001)。将C6细胞中差异蛋白条带与神经干细胞共培养,与对应的星形胶质细胞蛋白条带相比,可观察到与相对分子质量约67000蛋白胶条共培养的神经细胞球在接近蛋白胶条的一侧细胞向胶条迁移生长。结论:C6细胞可以诱导体外培养的神经干细胞迁移,其总蛋白在自然系统聚丙烯酰胺凝胶电泳分离实验中获得的相对分子质量为67000的蛋白组分具有诱导神经干细胞迁移的活性。
- 高宜录李传友林社裕沈剑虹刘梅
- 关键词：神经干细胞C6细胞星形胶质细胞细胞迁移
- C6胶质瘤细胞体外诱导神经干细胞的迁移被引量：6
- 2006年
- 目的：体外观察 C6胶质瘤细胞的培养上清是否有诱导神经干细胞迁移的作用。方法：实验组取处于指数生长期的 C6胶质瘤细胞或星形胶质细胞的无血清培养上清加入细胞培养室的下室,并加无血清培养基；培养室的上室加处于对数生长期的神经干细胞球悬液,培养箱中共培养,光镜下计数迁移的细胞球数。结果：C6胶质瘤细胞的上清引起神经干细胞球迁移的数目明显多于星形胶质细胞的上清和新鲜无血清培养基。结论：C6胶质瘤细胞的培养上清中存在诱导神经干细胞球迁移的物质,这将为研究诱导神经干细胞迁移的物质提供很大的便利。
- 林社裕高树梓刘梅高宜录
- 关键词：神经胶质瘤干细胞神经元细胞运动
- 脑胶质瘤中膜联蛋白A2的表达及意义被引量：3
- 2010年
- 目的：研究膜联蛋白A2在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性，探讨其成为胶质瘤诊断标志物的可能性。方法：分别使用RT—PCR和免疫组化法检测胶质瘤和瘤周组织中膜联蛋白A2的mRNA及蛋白表达水平。结果：RT-PCR法显示胶质瘤中膜联蛋白A2mRNA的表达率和表达量远远高于瘤旁脑组织（P〈0．05），免疫组化的结果也显示胶质瘤中膜联蛋白A2的表达高于瘤旁组织（P〈0．05）。结论：胶质瘤中膜联蛋白A2表达明显高于瘤周脑组织，且和胶质瘤病理分级呈正相关，可作为胶质瘤诊断辅助指标之一。
- 卢仲谦高宜录陆建霞
- 关键词：膜联蛋白A2逆转录聚合酶链反应法免疫组织化学法
- C_6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的:观察体外培养的胶质瘤细胞在体外能否引起神经干细胞的迁移,从而为研究胶质瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础。方法:分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。以星形胶质细胞为对照,做细胞迁移实验,观察其结果;将C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的无血清培养上清分别浓缩,并行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察其结果。结果:(1)C6胶质瘤细胞的培养上清引起神经干细胞迁移的数目明显多于星形胶质细胞的培养上清和新鲜无血清培养基(P<0.01);(2)将无血清培养的等浓度的C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的上清浓缩蛋白电泳,可见二者蛋白条带存在明显差异。结论:(1)从新生大鼠大脑皮层组织可以培养出神经干细胞和星形胶质细胞。(2)C6胶质瘤细胞无血清培养的上清中存在着能够诱导神经干细胞迁移的物质。
- 高树梓高宜录林社裕刘道坤
- 关键词：胶质瘤细胞神经干细胞星形胶质细胞细胞迁移
- 双向电泳技术分析大鼠星形细胞和C6细胞的蛋白差异
- 2008年
- 目的:建立大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达差异。方法:提取大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中的总蛋白,进行第一向等电聚焦(IEF)和第二向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离总蛋白,GS-800获得凝胶图像,并测量不同凝胶间蛋白斑点在IEF和SDS-PAGE方向上的位置偏差,使用PDQuest7.3软件对凝胶图像进行分析,找出星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的差异表达蛋白。结果:星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的蛋白表达谱上,分别检测到523±16和550±20个蛋白点,平均匹配点数为452±18和472±21,匹配率达86.4%和85.8%,不同凝胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(0.67±0.48)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.73±0.56)mm,对比分析了星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的2-DE图谱,发现有24个点发生了明显的表达变化(P<0.01),在星形胶质细胞中高表达的点有8个,在C6胶质瘤细胞中高表达的点有14个,星形胶质细胞中没有发现表达的点有2个。结论:建立了大鼠星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞的双向电泳技术体系,发现两者的双向电泳图谱存在明显差异,C6胶质瘤细胞中表达上调以及星形胶质细胞中没有发现表达的蛋白可能与肿瘤的发生,神经干细胞的迁移有关,表达下调的蛋白可能与抑制肿瘤的发生有关。
- 刘鹏孙华林高宜录
- 关键词：双向电泳C6胶质瘤细胞星形胶质细胞
- C6细胞和星形细胞对神经干细胞体外迁移分化的不同影响被引量：4
- 2006年
- 目的观察C6细胞和星形细胞在体外对神经干细胞(NSCs)迁移和分化是否有不同影响,为进一步研究调节NSCs迁移、分化的因子打下基础。方法取处于指数生长期的C6细胞、星形细胞分别与NSCs限定区域培养,观察NSCs的形态变化和迁移方向。并用二者的无血清培养上清和无血清培养基分别加入“TranswellInserts”细胞培养系统的下室,培养室的上室加NSCs悬液,共培养36h,光镜下计数位于培养系统中间膜上的细胞球数,并观察其形态变化。结果与C6细胞共培养的NSCs向C6细胞生长的方向迁移,而与星形细胞共培养的NSCs则呈分化现象。C6细胞的上清引起神经球迁移的数目明显多于星形细胞的上清和无血清培养基(P<0.01),星形细胞的上清则明显引起NSCs突起生长。结论C6细胞主要引起NSCs迁移,而星形细胞主要引起NSCs分化。
- 高宜录李传友高树梓林社裕刘梅
- 关键词：C6细胞星形细胞细胞迁移
- 层粘连蛋白受体与配体在C6胶质瘤细胞中的表达及意义被引量：2
- 2007年
- 目的检测层粘连蛋白受体与配体在C6胶质瘤细胞中的表达水平,探讨两者在胶质瘤细胞侵袭性生长和诱导神经干细胞迁移中的意义。方法从新生3～5 d的SD大鼠大脑皮层中分离和培养星形胶质细胞为对照,同时培养C6胶质瘤细胞。采用半定量RT-PCR方法分析层粘连蛋白受体和配体mRNA在星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中表达的差异。结果星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞中均表达层粘连蛋白受体和配体mRNA,而C6胶质瘤细胞呈明显高表达(P<0.05,P<0.01)。结论C6胶质瘤细胞中表达上调的层粘连蛋白受体和配体可能是胶质瘤细胞侵袭性生长和诱导神经干细胞迁移的因素之一。
- 高宜录张鹏刘梅
- 关键词：层粘连蛋白受体层粘连蛋白胶质瘤星形胶质细胞神经干细胞
- 神经干细胞及衍生支持因子在大鼠脊髓损伤后的变化
- 2007年
- 目的:神经干细胞及其支持因子均与中枢神经损伤后的神经再生有关.但目前有关神经干细胞及其衍生支持因子在体内和脊髓损伤后是否有变化的证据较少。观察神经干细胞及其衍生的神经干细胞支持因子在大鼠脊髓损伤后的变化规律.探讨它们之间的相互关系。方法:实验于2005-09/2006-03在南通大学神经科学研究所实验室完成,①实验材料:清洁级SD大鼠27只由南通大学实验动物中心提供,将12只大鼠分为假手术组和脊髓损伤组用于免疫组织化学.另15只用于RT-PCR检测.分为假手术组和脊髓损伤组.实验过程中对动物处置符台动物伦理学标准。②实验方法:按Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型,假手术组仪切除椎板,未行脊髓打击。用免疫组织化学方法鉴定脊髓组织中神经干细胞标志物nestin、胶质细胞标志物GFAP和神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性细胞在脊髓损伤后8.16 d的数量和形态变化;采用半定量RT-PCR检测神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子mRNA在脊髓中的表达及损伤后4、8、12、16 d的变化。结果:①假手术组脊髓中央管附近出现巢蛋白阳性细胞脊髓损伤后8 d.巢蛋白阳性细胞增多,细胞变大.向外周迁移,并发出突起,以着力侧为著,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞出现增多,并出现表达神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性类似神经元形态的细胞。脊髓损伤后16 d,nestin阳性细胞数量明显减少,以GFAP阳性细胞增生为主.神经干细胞衍生的神经干细胞支持因子阳性细胞少见。②RT-PCR检测神经干细胞支持因子mRNA在正常大鼠脊髓中有表达,脊髓损伤后4 d神经干细胞支持因子的mRNA表达上升.损伤8 d为高峰,16 d恢复到近正常水平。结论:①在正常大鼠脊髓中央管附近存在神经干细胞.在脊髓损伤后出现增殖,随后可能分化为神经胶质细胞。②在正常脊髓有神经干
- 高宜录冯毅
- 关键词：神经胶质细胞脊髓损伤
- 多因子调控神经干细胞迁移被引量：3
- 2010年
- 熊方令高宜录
- 关键词：神经干细胞迁移信号分子
