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新疆野生油菜无菌苗的无性繁殖研究: 2010年; 以新疆野生油菜18号无菌苗为材料,研究了其在武汉亚热带季风性湿润气候条件下的快速繁育技术,提出了以离体培养结合常规栽培技术快速繁殖新疆野生油菜的生产程序。结果表明,以中上部茎段为材料,采用无激素的MS培养基作为无性繁殖基质,在无菌苗生根后移栽成活容易。对下胚轴愈伤组织的诱导以MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA3+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基效果较好。; 孙慧慧闫晓红王力军叶永忠魏文辉; 关键词：新疆野生油菜无菌苗无性繁殖

植物基因叠加技术的研究进展被引量：2: 2011年; 将不同外源基因转入植物并实施基因叠加是植物基因工程技术发展的一个重要方向。虽然在商业化的转基因作物中,一部分已经实现了基因叠加和优良性状的重组,但只是极少数转基因事件实现了3个或者更多外源基因的导入。为此,综述了基因叠加的几种主要方法,分析了其面临的问题,并对其发展前景进行了展望。; 谭茂玲李晨闫晓红梁国鲁魏文辉; 关键词：植物转基因

构建甘蓝型油菜Nsa雄性不育系与NR1恢复系可育后代幼小花蕾的全长cDNA文库: 2010年; 以甘蓝型油菜新型恢复系NR1与不育系杂交后代可育植株幼小花蕾为材料,采用SMART（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）技术构建了其全长cDNA文库.原始文库的滴度为5.2×107pfu/mL,重组率达96%.随机挑取21个噬菌斑,利用PCR扩增插入片段,电泳结果显示其长度集中在0.7~2 kb之间,平均大小约为1.1 kb.采用铺平板法扩增文库,扩增后的文库滴度为4.3×1012pfu/mL.结果表明,所构建的文库达到了用于分离目的基因的建库要求,为后续恢复基因等重要功能基因全长cDNA的分离克隆奠定了基础.; 闫晓红黄进勇李晨胡琼魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜全长CDNA文库

修饰的Ac/Ds转座子元件在油菜中的遗传转化与鉴定被引量：4: 2010年; 玉米Ac/Ds转座子系统已被成功应用于多种异源植物进行基因的分离与克隆.本研究利用农杆菌介导法将含有Ac元件的质粒pUbiAc及含有Ds元件的质粒pDsBar1300分别转化甘蓝型油菜中双6号的子叶柄与下胚轴,分别获得了Ac和Ds的转化植株.PCR检测发现,在10株Ac转化植株中有1株为阳性苗,阳性率为10%;在28株Ds转化植株中有21株阳性苗,阳性率为75%.该结果为下一步构建油菜突变体群体及开展油菜功能基因组学研究将开辟一个新的途径.; 徐娟闫晓红王力军黄进勇魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜 PCR鉴定

烟草rbcS启动子的克隆与活性鉴定被引量：4: 2010年; 为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,采用PCR技术从烟草栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及十几种光应答元件,与已报道序列的相应区域同源性达99%。将其与GUS融合蛋白基因串连,构建了植物表达载体prbcS-121,通过根癌农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将pBI121及prbcS-121转化烟草。对转基因烟草植株中GUS活性测定结果表明,烟草rbcS启动子具有叶部组织特异性,且在叶部启动基因表达能力较CaMV35S启动能力强,从而为外源基因在转基因烟草叶片中的高效表达提供了新的工具,为后续目的基因能在烟草叶部发生组织特异性和光诱导性表达奠定了基础。; 孙家利闫晓红王力军时向东魏文辉; 关键词：烟草 GUS活性转基因烟草

甘蓝型油菜A基因组候选BAC克隆的筛选及其插入片段大小分析被引量：1: 2010年; 选择甘蓝型油菜A基因组10个连锁群上特有的85个SSR分子标记,合成其引物序列,采用四维PCR法筛选甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系BAC文库,成功筛选到甘蓝型油菜A基因组39个BAC克隆,其插入片段介于50～300 kb之间,平均为120 kb。甘蓝型油菜A基因组10个连锁群BAC克隆的获得,对后续开展甘蓝型油菜A基因组染色体识别、基因染色体定位、遗传距离与物理距离间关系分析等均具有重要价值。; 王太霞闫晓红查敏敏王力军魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜 A基因组 SSR标记 BAC克隆

甘蓝型油菜BnADC基因的克隆及原核表达被引量：1: 2012年; 利用同源克隆和RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术从甘蓝型油菜中克隆到精氨酸脱羧酶(Arginine decarboxylase,ADC)基因cDNA全长序列,命名为BnADC。BnADC全长为2 649bp,包含344bp的5'非翻译区(5'Untranslated region,5'-UTR)、226bp的3'非翻译区(3'Untranslated region,3'-UTR)和2 079bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码75.1kD的蛋白质。5'-UTR中含有12bp的uORF(Upstream open readingframe),编码MIRE 4个氨基酸。氨基酸同源性比对表明,BnADC蛋白与其他植物ADC蛋白具有很高的相似性,与芥菜的同源性高达93%;系统进化树分析表明,BnADC与芥菜、拟南芥的ADC亲缘关系较近。在获得全长cDNA的基础上,构建融合表达载体pET30a(+)-BnADC,转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE检测到一个约81.1kD的融合蛋白被E.coil表达,且融合蛋白主要存在于菌体沉淀中。; 洪林闫晓红袁亚宾刘王辉胡长清李晨陈春丽魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜同源克隆 RACE 原核表达

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究被引量：4: 2010年; 以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。; 孙慧慧闫晓红叶永忠魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜原生质体培养植株再生

甘蓝型油菜新型恢复系Nsa恢1及其后代的GISH分析被引量：3: 2008年; 用基因组原位杂交(genomicin situhybridization,GISH)结合双色荧光原位杂交(double-colour fluo-rescencein situhybridization,dc-FISH)技术,对甘蓝型油菜新型恢复系Nsa恢1及其后代进行了研究,结果表明,Nsa恢1为甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系,包含了甘蓝型油菜全基因组和新疆野生油菜1对染色体,这1对新疆野生油菜染色体为同源染色体.不育系分别与保持系、恢复系Nsa恢1、保持系杂交后获得了BC3代不育株及可育株,GISH-dcFISH分析结果表明,BC3代可育株为甘蓝型油菜-新疆野生油菜单体异附加系,而不育株中不含新疆野生油菜染色体.说明恢复基因位于Nsa恢1的新疆野生油菜染色体上,为下一步克隆这一新型恢复基因提供了依据.; 黄进勇胡琼魏文辉王力军闫晓红向瑞勇王清坤; 关键词：甘蓝型油菜新疆野生油菜恢复系恢复基因

甘蓝型油菜DH植株创建及其倍性的流式鉴定被引量：9: 2010年; 以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系的小孢子为试验材料,研究取样时期、花蕾大小、培养基类型及添加成分对小孢子产胚率的影响,利用流式细胞仪对小孢子再生植株及加倍植株进行了准确、快速的倍性分析。结果表明,始花期为最佳取蕾时期,花蕾大小在2.5~3.5mm为宜,培养基以液体培养基最好。培养基中加入0.1mg/L6-BA可以促进小孢子胚的发生,而活性炭对小孢子培养没有明显的促进作用。流式细胞仪倍性检测显示小孢子再生植株加倍后的双单倍体（doubled haploid,DH）占49%,还存在少量的三倍体（11.3%）、四倍体（1.1%）及嵌合体（27.3%）植株。本研究为油菜材料的快速纯合及其DH系群体的构建等提供了新的经验。; 介智靖闫晓红方小平杨洁黄进勇魏文辉; 关键词：甘蓝型油菜小孢子单倍体双单倍体倍性鉴定

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