江苏省社会发展科技计划(BE2010603)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：蔡冉潘英周洁李越希李素芹更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学中国药科大学更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 金黄色葡萄球菌外膜蛋白FnBPA表达及单克隆抗体的制备
- <正>目的:金黄色葡萄球菌(又称金葡菌)是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,它寄生于人类皮肤和鼻粘膜表面,占医院感染和社区获得性感染的大部分。金葡菌也是引起食物中毒的重要因素。目前对金葡菌的检测方法有传统...
- 许桂丽蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性被引量：1
- 2014年
- 目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P<0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P<0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
- 周洁蔡冉徐悦玥潘英李素芹尚彦红许桂丽袁敬宇马颖张素芬李越希
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞免疫活性
- 大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H7抗原的原核表达和纯化
- <正>目的:鞭毛蛋白(H7)是肠出血性大肠杆菌重要的毒力因子,其编码基因为flic。主要由三部分区域组成:两端高度保守的C1区和C2区及中间高变C3区。H7鞭毛在启动O157:H7与肠道黏膜、黏液或者同时与两者结合过程中...
- 蔡冉许桂丽周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- HSV-1 gD1,HSV-2 gC2、gD2蛋白真核表达纯化、免疫原性检测及联合免疫效果检测
- <正>目的:单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)是人类病毒感染性疾病中常见的病原体,易导致潜伏性和复发性感染。HSV分为HSVⅠ型和HSVⅡ型,编码至少有12个糖蛋白,其中gD蛋白足宿主产生体...
- 周洁许桂丽蔡冉张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- 抗大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原单克隆抗体的制备和鉴定
- 目的:鞭毛蛋白(H7)是肠出血性大肠杆菌重要的毒力因子,其编码基因为flic。主要由三部分区域组成:两端高度保守的C1区和C2区及中间高变C3区。H7鞭毛在启动O157:H7与肠道黏膜、黏液或者同时与两者结合过程中发挥着...
- 蔡冉许桂丽周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 关键词：O157:H7FLIC单克隆抗体
- 文献传递
- 肺炎衣原体特异性抗原表位的筛选及表达鉴定
- <正>目的:肺炎衣原体(Chl锄ydia pneumoniae,Cpn)感染极为普遍,呈世界性的分布,主要引起人类的呼吸道感染,是继肺炎链球菌和流感嗜血杆菌之后引起社区获得性肺炎(community acquired p...
- 许桂丽蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- 抗Ⅱ型单纯疱疹病毒表面抗原gD单克隆抗体的制备及鉴定
- 2012年
- 制备抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(Simplex Herpes VirusⅡ,HSV-2)表面抗原gD的单克隆抗体(mAb)并对其性质进行鉴定。以基因工程重组制备纯化的HSV2-gD为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规融合制备杂交瘤细胞,通过HAT选择培养、有限稀释法获得单克隆细胞株,用间接ELISA法、Western blot方法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。获得了4株可稳定分泌抗HSV2-gD抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A11C6、1A11F10、4C9D5以及4C9E9,抗体的类型均为IgG1,轻链均为κ型,Western blot结果显示各单抗都可以特异性识别HSV2-gD。用杂交瘤细胞注射小鼠制备腹水,腹水内的抗体效价均大于1×10-5,腹水内的抗体经硫酸铵-辛酸分级沉淀和阴离子交换柱纯化,成功制备了纯度超过95%的高特异性抗体,抗体有较好的特异性。为进一步研究HSV2感染和临床上的预防、诊断及治疗提供了有力的工具。
- 王耀刘武周洁蔡冉潘英李素芹张庶民李越希
- 关键词：糖蛋白D单克隆抗体酶联免疫法
