国家自然科学基金(30671319)
- 作品数：16 被引量：88H指数：7
- 相关作者：黄三文李颖屈冬玉杜永臣辛翠花更多>>
- 相关机构：中国农业科学院蔬菜花卉研究所东北农业大学中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 拟南芥抗病基因FLS2和LysM的亚克隆及其在番茄中的表达
- 2009年
- 从拟南芥JAtYTAC基因组文库中完整地亚克隆了FLS2和LysM两个抗病基因,亚克隆的DNA片段中分别包含各自的启动子、内含子和终止子。利用农杆菌介导的方法分别将这两个基因转化番茄品种‘Moneymaker’,转基因植株经PCR初步筛选后再分别提取总RNA进行RT-PCR,以验证其是否在‘Moneymaker’中表达。试验结果表明,FLS2和LysM均能成功地在‘Moneymaker’中表达,说明番茄的转录系统不仅能识别这两个抗病基因的启动子并起始转录,还能正确识别并剪切这两个基因的外显子和内含子。据此推测,拟南芥和番茄这两个远缘物种的转录机制存在相对保守的成份,这为探索在这两个物种间R基因的功能及其下游信号通路的保守性提供了有价值的参考。
- 陈武杨玉婷李颖黄三文黎定军
- 关键词：拟南芥番茄亚克隆
- 马铃薯晚疫病抗性基因R11的遗传定位被引量：8
- 2009年
- 由致病疫霉菌(Phytophthora infestans)引起的晩疫病是世界范围内最具毁灭性的马铃薯(Solanum tuberosum)病害。以含有晚疫病抗性基因R11的材料MaR11和不含已知抗性基因的品种Katahdin为亲本进行有性杂交,对获得的F1分离群体的83个基因型进行了晚疫病菌株接种鉴定和遗传分析。结果表明,R11为主效单基因,在MaR11中以单式形式(R11r11r11r11)存在。应用比较作图和分离群体分组分析(BSA),开发了6个与R11连锁的分子标记,并将R11定位于11号染色体长臂末端。R11距C2_At5g59960标记最近,约为2.4 cM。通过遗传图谱比较表明,R11较晚疫病抗性基因R3a和R10更靠近染色体端粒区。本研究所获得的遗传图谱为进一步构建R11高密度遗传图谱提供了基础。
- 徐建飞黄三文金黎平段韶光屈冬玉
- 关键词：马铃薯晚疫病
- 利用比较基因组学定位马铃薯抗晚疫病主效基因R10被引量：4
- 2007年
- 晚疫病是马铃薯第一大病害。马铃薯抗晚疫病基因R10抗谱广、应用价值大,常用于马铃薯抗病杂交育种。R10位点位于马铃薯11号染色体的短臂末端,与已克隆的抗晚疫病基因R3a同属于抗晚疫病主效位点的单倍型。对包含195个基因型的R10基因的分离群体进行了晚疫病菌株接种和遗传分析,确定R10为抗晚疫病菌株89148-9的主效单基因。应用比较基因组学和BSA分析,开发了6个与R10连锁的分子标记,并将R10定位在1001T和C2_At5g59960两个遗传距离为2.6cM分子标记之间。R10位于已克隆的抗晚疫病基因R3a的近端粒区。本研究所获得的遗传图谱为通过图位克隆和比较基因组学克隆R10基因打下基础。
- 徐建飞王加加李颖金黎平JACOBSEN Evert黄三文屈冬玉
- 关键词：马铃薯晚疫病
- 加工型马铃薯品种Shepody农杆菌介导的转化体系研究被引量：4
- 2011年
- 马铃薯Shepody是经济价值很高的炸条加工品种,但Shepody对逆境胁迫非常敏感,为确立Shepody的遗传转化体系并获得转基因马铃薯,以叶片、茎段和微型薯为外植体,分别比较了不同转化条件(菌液浓度、侵染时间及激素配比)对遗传转化效率的影响。结果表明:叶片为最理想的外植体,以OD600=0.5的菌液侵染10min,在加有1.0mg/L萘乙酸(NAA)和1.0mg/L反式玉米素(ZT-t)的MS20选择培养基上的遗传转化率最高,其愈伤诱导率可达到95%,分化率可达到20%。通过该转化体系将抗晚疫病基因R1导入马铃薯,获得了具有卡那霉素抗性的转化植株,经PCR鉴定外源基因已经成功导入马铃薯基因组中。
- 辛翠花黄三文郭江波刘杰冷小云屈冬玉
- 关键词：马铃薯SHEPODY外植体
- 国际马铃薯和番茄基因组测序进展被引量：6
- 2008年
- 国际番茄基因组项目计划精细测定220Mb的常染色质区域,马铃薯基因组项目计划测定全基因组840Mb的DNA序列。中国是两个项目的参与国,负责番茄染色体Ⅲ、XI和马铃薯染色体X、XI的测序工作。基于番茄和马铃薯基因组间存在着高度的相似性,在二者染色体XI测序的同时运用了比较测序的方法。
- 贺俊张忠华李颖杜永臣屈冬玉黄三文
- 关键词：番茄马铃薯基因组测序比较基因组学
- 马铃薯抗晚疫病转基因材料的获得及活性氧清除酶系与抗病过程关系分析被引量：9
- 2008年
- 【目的】获得马铃薯抗晚疫病转基因材料,初步分析活性氧清除酶系与抗病过程的关系。【方法】通过农杆菌介导的方法,以茎段为外植体,将抗晚疫病基因R1、R3a和RB分别转化马铃薯感病栽培品种Desiree,并通过特异PCR扩增目的基因、无菌苗快速抗病鉴定和离体叶片接种鉴定、RT-PCR分析来筛选阳性转化株系。并测定转基因株系和野生型接种晚疫病原菌生理小种89148-9后,体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性变化。【结果】结果证明,3个抗晚疫病基因都已经整合进入马铃薯基因组中并稳定表达,所获得的转基因株系接种小种89148-9后其抗性有不同程度的提高,大部分表现为高抗或抗病,有明显的HR反应;转基因株系在接种小种89148-9后3种酶的活性都升高,且活性高峰比野生型早。【结论】获得了一批高抗或抗晚疫病的马铃薯转基因材料;活性氧清除酶系可能参与了R基因介导的抗病过程。
- 辛翠花李颖刘庆昌屈冬玉黄三文
- 关键词：马铃薯晚疫病超氧化物歧化酶过氧化物酶过氧化氢酶
- 利用VIGS技术研究马铃薯抗晚疫病基因R3a和RB的信号传导被引量：14
- 2009年
- 利用VIGS技术,在烟草中沉默已知的抗病信号传导关键基因SIPK、NDR1、SGT1、HSP90、NPR1、Rar1、EDS1、WRKY1,再瞬时表达马铃薯抗病基因和其相应的无毒基因RB-Avrblb1和R3a-AvR3a,根据过敏反应(Hypersensitive Response,HR)是否被阻断来研究RB和R3a介导的抗病信号传导。结果发现SGT1和HSP90基因沉默阻断了HR反应的发生,表明SGT1和HSP90是参与RB和R3a抗病信号传导途径过程中的关键基因。该技术体系的建立,为发现新晚疫病抗病相关基因的功能验证提供了一个高效的技术平台。
- 崔艳红贾芝琪李颖黄三文
- 关键词：晚疫病烟草
- 无选择标记的植物表达载体的构建被引量：8
- 2008年
- 以双元载体pBINPLUS为基础,在T-DNA侧翼区通过2次特异PCR、酶切和连接相结合的方法,构建了1个无标记载体pBINMF(marker-free vector)。通过酶切后测序分析,这个无标记载体在T-DNA左、右边界之间只有1个多克隆位点(multiple cloned sites,MCS)。为了验证该载体的遗传稳定性,将gus基因克隆到该载体上并通过农杆菌介导的方法转化番茄栽培品种‘Moneymaker’,特异PCR扩增目的基因和GUS组织染色结果表明,gus基因已经整合进入番茄基因组并得以表达。该载体为今后直接获得无标记基因、生物安全的转化体,尤其可为马铃薯、木薯等无性繁殖材料的无标记基因转化提供可靠、有效的工具。
- 辛翠花刘庆昌屈冬玉黄三文
- 关键词：转基因番茄
- 马铃薯抗晚疫病基因R3a、R1和RB在番茄中的表达被引量：7
- 2009年
- 晚疫病由疫霉菌(Phytophthora infestans)引起,主要侵染番茄和马铃薯等茄科作物,造成巨大的经济损失。马铃薯已有5个抗晚疫病基因被克隆。为了研究已克隆的马铃薯抗晚疫病基因是否在番茄中起作用,将马铃薯的抗晚疫病基因R3a、R1和RB通过农杆菌介导法分别导入番茄品种Moneymaker中。筛选得到的再生植株经PCR检测结果表明,目的基因已整合入番茄基因组;转基因番茄离体叶片接种验证结果表明,接种马铃薯晚疫病菌株89148-9(即小种0),转基因番茄产生了抗病的过敏反应(HR反应)。为了验证转基因番茄是否对番茄晚疫病菌株产生抗性,用番茄晚疫病的主流小种和强致病力菌株共5个菌株接种转基因番茄植株,结果表明转R3a和R1基因的番茄对部分番茄晚疫病菌株能够产生抗性,RB转基因植株叶片对5个番茄晚疫病菌株均产生抗性。该研究为番茄抗晚疫病的基因工程育种开辟了新的途径。
- 贾芝琪崔艳红李颖杨宇红黄三文杜永臣
- 关键词：番茄马铃薯转基因晚疫病RB
- 蔬菜和马铃薯转基因现状和前景
- 2006年
- 转基因技术能定向改良现有优良品种,将在新品种选育中发挥巨大的作用。本文主要介绍蔬菜和马铃薯转基因的国内外研究进展及产业化情况,总结国内工作基础,探讨未来发展趋势,并对我国研究的重点提出建议。
- 黄三文
- 关键词：转基因技术马铃薯蔬菜新品种选育
