国家质检总局科技计划项目(2007IK025)
- 作品数：5 被引量：85H指数：4
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- 相关机构：云南出入境检验检疫局昆明理工大学深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划质检公益性行业科研专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究被引量：2
- 2014年
- 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。
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- 关键词：小反刍兽疫病毒N蛋白单克隆抗体竞争ELISA
- 小反刍兽疫病毒N基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2008年
- 根据小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria75/1的全基因序列,通过PCR方法,将N基因亚克隆入pBAD/TOPO表达载体,构建了原核表达质粒pBAD-PPRN。该重组质粒转化至大肠埃希菌TOP10中,经L-Arabinose诱导,SDS-PAGE和Western blot检测,表达的重组N蛋白分子质量与预期的73.6ku一致,为以小反刍兽疫N蛋白为抗原的诊断试剂盒研制奠定了基础。
- 艾军杨建明叶玲玲杨晓花张其艳董俊孙洪正周晓黎
- 关键词：小反刍兽疫N基因原核表达
- 小反刍兽疫流行病学及防控研究进展被引量：71
- 2012年
- 小反刍兽疫是山羊、绵羊以及一些野生小反刍动物的一种急性或亚急性接触性传染病,自从首次发生以来一直呈扩大趋势,成为了严重危害畜牧业生产安全的重大跨国动物疫病之一。诊断技术和疫苗接种是预防控制小反刍兽疫的重要手段,根据小反刍兽疫典型的临床症状可初步做出假设性诊断,但确诊需要实验室诊断技术的支持。论文从小反刍兽疫目前的世界分布情况、小反刍兽疫病毒的起源以及易感动物等方面阐述了该病的流行病学特征,介绍了小反刍兽疫病毒实验室诊断技术的研究进展及几种具有应用前景的小反刍兽疫疫苗,为该病的研究和有效防控提供依据。
- 龙云凤刘晓慧周晓黎祝贺艾军董俊叶玲玲陈朝银
- 关键词：小反刍兽疫流行病学疫苗
- 小反刍兽疫的诊断方法和疫苗研究现状
- 小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)对绵羊和山羊的发病率和死亡率分别可高达100%和90%[1],在发展中国家引起严重的社会经济问题,被OIE列为A类疾病。该病首次...
- 尹尚莲艾军叶玲玲董俊杨晓花张其艳周晓黎
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用被引量：4
- 2012年
- 针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。
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- 关键词：小反刍兽疫单克隆抗体
- 小反刍兽疫病毒N基因在昆虫细胞中的表达被引量：6
- 2011年
- 为了研发小反刍兽疫病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原物质,参照GenBank公布的小反刍兽疫疫苗株Nigeria75/1的全基因组序列(GenBank登录号:X74443),人工合成表达核蛋白的N基因开放阅读框序列,通过PCR扩增、经引物设计引入的EcoRⅠ和KpnⅠ特异性酶切位点,将N基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,阳性重组质粒命名为pFastBacHTA-PPRV-N,测序结果显示N基因片段长度为1 578bp。将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-PPRV-N,将该重组穿梭质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blot分析表明该蛋白得到表达产物,具有与抗体反应的活性,大小约为61.3ku。
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- 关键词：小反刍兽疫病毒N基因昆虫细胞
